2011年执业药师考试辅导《药物分析》讲义0501.docVIP

第五章　分光光度法 　　考试要求： 分光光度法 （一）紫外-可见分光光度法 1.紫外-可见吸收光谱和光的吸收定律 （1）紫外-可见吸收光谱的产生（2）光的吸收定律和吸收系数 2.测定法 测定方法及要求 3.应用 （1）鉴别（2）杂质检查（3）含量测定 （二）红外分光光度法 1.红外光谱 红外光谱的产生及其特点 2.红外光谱与物质结构的关系 典型基团的特征吸收 3.测定法 （1）测定方法（2）注意事项 4.应用 （1）鉴别（2）杂质检查 　　分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内的吸光度或发光强度，对该物质进行定性、定量分析的方法。包括：紫外-可见分光光度法、荧光光度法、红外分光光度法　　1.光谱范围：　　　　2.价电子的跃迁：　　光是具有能量的，价电子吸收能量由低能量的基态转变为高能量的激发态。　　　　 第一节　紫外-可见分光光度法 　　重点：　　1.紫外分光光度法的定量的原理、应用　　2.紫外分光光度计的结构、校正　　　　一、基本原理　　1.紫外分光光度法定性原理：　　价电子跃迁需要的能量等于一定波长光具有的能量，此种物质会吸收这个波长的光。　　不同结构的物质分子能级差不同，能吸收不同波长的光，可以产生不同的紫外-可见吸收光谱，据此可以对物质进行定性分析。　　2.紫外分光光度法定量原理：　　吸光度：物质对光吸收的程度　　分子对特定波长光的吸收程度除了与分子的结构有关外，还与被测物质溶液的浓度有关。单色光穿过吸光物质溶液时，在一定的浓度范围内，被该物质吸收的光量与该物质溶液的浓度和液层的厚度（光路长度）成正比。——朗伯比尔定律。　　　　式中A为吸光度，T为透光率，E为吸收系数，C为被测物质溶液的浓度，L为液层厚度。　　吸收系数：　　吸收系数E是物质的物理常数，随浓度C单位的不同，吸收系数E有不同的意义和表示方法。　　摩尔吸收系数：在某一波长下，溶液浓度为1mol/L、液层厚度为1cm时的吸光度，用ε表示　　百分吸光系数 ：在某一波长下,溶液浓度为1%（g/ml）、液层厚度为1cm时的吸光度。用表示。（在药品检验中使用）　　E与的关系：　　　　吸收系数越大，表示该物质对光的吸收能力越强。　　3.紫外吸收光谱　　紫外吸收光谱的纵坐标一般用吸光度表示，横坐标为紫外光的波长。　　　　　　二、紫外分光光度计　　　　1.光源：氘灯（紫外光）、钨灯（可见光）　　2.单色器：分离出测定波长的光。包括：进口狭缝、准直镜、色散元件（棱镜和光栅）、聚焦透镜和出口狭缝　　3.吸收池：玻璃（只能用于可见光区），石英（可用于紫外区，也可用于可见区）　　　　4.检测器：光电池、光电管或光电倍增管　　　　补充：仪器校准（第二章相关内容）　　校准内容：波长、吸光度准确性、杂散光 　　波长：定期校正、测定前校正　　吸光度的准确度：用重铬酸钾的硫酸溶液来检定，不同波长下，吸光系数符合要求　　杂散光：一定浓度的碘化钠和亚硝酸钠溶液，在杂散光影响比较显著的波长处测定透光率　　　　三、吸光度的测定方法　　校准仪器——准备样品——选择测定波长——进行空白试验——测定样品　　　　　　　（空白样品、试验样品）　　药典对吸光度的测定有要求　　1.溶剂：　　★ 能充分溶解样品　　★ 与样品无相互作用　　★ 挥发性小外　　★ 在测定波长下吸光度符合要求　　检查方法：以空气为空白，在特定的波长下，溶剂在1cm石英吸收池中吸光度应符合要求。　　2.空白试验　　目的：扣除测定的影响因素。如：容器、溶液中的其他杂质、光的散射　　方法：用参比溶液调吸光度为0，再测定样品吸光度。　　参比溶液：不含要测定样品的溶液。　　3.测定波长的检查　　吸光度的测定一般在最大吸收波长（λmax）处，以提高测定灵敏度，减小测定误差　　方法：在规定的吸收峰波长±2nm以内测试几个点的吸光度，选择最大吸收波长　　4.供试品溶液的浓度　　吸光度读数在0.3～0.7之间为宜　　5.仪器狭缝宽度的选择　　狭缝宽度增加，吸光度下降。　　以减少狭缝宽度时，供试品溶液的吸光度不再增加为准。　　　　四、应用　　1.定性鉴别　　依据：相同的化合物有相同的光谱　　★ 核对吸收光谱的特征参数：最大吸收波长（λmax）、吸收系数（）、吸光度（A）　　如图：布洛芬0.4%氢氧化钠溶液制成每1ml中含0.25 mg的溶液，在265nm与273nm的波长处有最大吸收，在245nm与271nm的波长处有最小吸收，在259nm的波长处有一肩峰。　　★ 对比吸收度（或吸收系数）比值：吸收峰较多，比较几个波长处的吸光度比值　　　　如图：布