家蚕Alltostatin及Allatotropin的基因组鉴定与表达特征分析.pdfVIP

第27卷 第3期 2007年 9月 7 家蚕Alltostatin及Allatotropin的基因组鉴定 、 与表达特征分析 黄 重 程道军 舒 旭 李志清 夏庆友 (西南大学生物技术学院，蚕学与系统生物学研究所 重庆 400716) 摘 要 抑咽侧体神经肽(Allatostatin，AS)和促咽侧体神经Jtk(Allatotropin，AT)是控制昆虫保 幼激素合成的激素。本研究应用BlastP程序，鉴定了家蚕基因组中的AS及AT，并发现它们只有 一 个拷贝。利用家蚕表达特征的全基因组芯片数据，调查了AS及AT在家蚕的组织和发育表达 特征。结果发现，AS在 5龄 3天至上蔟的发育阶段以及5龄3天的头部组织表达，相反，AT则没 有表达，这与保幼激素的活动规律较一致。但 AS在中肠的高表达是否有特殊的功能，还有待进一 步研究。这些分析为我们深入研究AS及AT在家蚕中的调控机制奠定了基础。 关键词 家蚕 抑咽侧体神经肽 促咽侧体神经肽 表达特征 近年来，国外的研究者以昆虫烟草天蛾为材料，通过反相高效液相色谱技术发现其保幼激 素的合成主要受两类神经肽激素控制，即抑咽侧体神经肽(Allatostatin，AS)和促咽侧体神经 肽(Allatotropin，AT)。这是一对相互拮抗的激素，AS具有抑制咽侧体合成保幼激素的作用， 使血液中保幼激素的浓度降低；AT则相反，其主要功能是刺激咽侧体，使其处于活化状态，从 而促进保幼激素的合成，使血液中保幼激素浓度升高[1]。目前，烟草天蛾、果蝇、按纹等昆虫的 AS和AT基因相继得到克隆。 家蚕既是重要的经济昆虫，也是研究鳞翅目昆虫的典型模式生物。目前，尚未见有关家蚕 AS及AT基因克隆分析的报道。克隆分析AS和AT基因，对于阐明家蚕保幼激素合成调节 的分子机制，探索建立家蚕和其它近缘昆虫发育过程的人为调控方法无疑非常重要。2004年 家蚕基因组序列测定的完成为我们提供了鉴定家蚕功能基因的机会[2]。本实验中我们主要利 用生物信息学方法预测。鉴定了家蚕基因组中的AS和 AT基因，探讨了它们的基因组结构。 并利用家蚕全基因组芯片数据对目标基因的表达特征进行了调查。 1 材料方法 1．1 AS及AT的基因组预测及分析 从GenBank数据库中下载昆虫AS及AT氨基酸序列，与家蚕的基因组数据库 。 进行 BLASTP比对，获得家蚕的AS及AT同源序列。运用在线工具sim4(pbil．univ—lyon1．fr／ members／duret／cours／inserm210604／exercise4／sim4．htm1)分析外显子和内含子边界。运用 资助项目：973计划(2005CB121000)、重庆市科委自然科学基金项目(CSTC，2005BB1 128)。 作者简介：黄重(1981一)，男，陕西汉中，硕士生。Email：huangchong68255ll1@126．corn 通讯作者：夏庆友，教授。Email：xiaqy@SWU．edu．cn 8 蚕 学 通 讯 27卷 PROSITE和SMART程序分析AS及AT的特殊基序和功能结构域。 1．2 家蚕AS及AT表达特征的全基因组芯片分析 、 利用家蚕5龄3 d生殖腺、前中部丝腺、后部丝腺、rp肠、体壁、马氏管、头、脂肪体、麻液等 9个组织及家蚕变态期2O个发育时间点的基因表达的全基因组芯片分析数据，调查了家蚕 AS及AT的组织和发育表达特征。 2 实验结果 2．1 AS及 AT的基因组鉴定 基于昆虫的AS及AT蛋白质序列，利用Blastp程序检索来源于家蚕基因组预测基因的 蛋白质序列，鉴定了与昆虫 AS及 AT同源的序列。其中Bmb020748编码 AS，命名为 BmAS，其编码的多肽链全长52个氨基酸。同源性检索发现，BmAS与美洲粘虫ASL 的相似 性最高，相似性达到88％。．BmbO18029编码AT，命名为BmAT，其编码的多肽链全长251个 氨基酸。同源性检索发现，BmAT与烟草天蛾AT[ 的相似性最高，相似性值