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棒状杆菌属种属及毒力鉴定 江苏嘉语生物医药技术有限公司 陈颖曦 棒状杆菌属及白喉棒状杆菌简介 棒状杆菌属(Corynebacterium)是一群革兰染色阳性杆菌。本属细菌的特点是菌体一端或两端膨大呈棒状，菌体染色不均匀，可出现异染颗粒。该菌属无荚膜、无鞭毛，不产生芽胞。种类较多，广泛分布于动、植物。可在人体皮肤、上呼吸道和泌尿生殖道粘膜等处定居。大多为非致病菌或条件致病菌，其中白喉棒状杆菌是唯一能引起人类致病且具较强传染性的菌种。 白喉棒状杆菌(C.diphtheriae)，俗称白喉杆菌，是白喉的病原菌。白喉是一种急性呼吸道传染病，患者咽喉部粘膜可出现灰白色的假膜。该菌能产生强烈外毒素，进入血液可引起全身中毒症状。菌体细长微弯，一端或两端膨大呈棒状。细菌排列不规则，常排列呈V、L等形状。革兰染色阳性。用美蓝短时间染色菌体着色不均匀，出现有深染的颗粒。用Neisser或Albert 等法染色，这些颗粒与菌体着染颜色不同，称为异染颗。颗粒的主要成分是核糖核酸和多偏磷酸盐，在鉴定时有重要意义。但当细菌衰老时异染颗粒被消耗而不明显，且细胞壁变薄易被脱色，常造成革兰染色不定，有时可表现为在革兰阴性的菌体中见有阳性颗粒或节段。 需氧或兼性厌氧。在血平板上可生长，菌落大小1~3mm。在含有凝固血清的吕氏血清斜面上生长迅速，涂片染色异染颗粒明显。分离培养时常用亚碲酸钾血平板作为鉴别选择培养基。因亚碲酸钾能抑制杂菌，而白喉棒状杆菌不受影响，并能吸收亚碲酸盐使其还原为黑色的金属碲，菌落呈黑色。白喉棒状杆菌在亚碲酸钾血平板上可形成三种不同形态特征的菌落，分别称为重型、轻型和中间型。三型的产毒株与疾病的轻重程度无明显的对应关系，但对流行病学分析具有一定意义。在我国以轻型多见。 白喉棒状杆菌对湿热抵抗力不强，58?C 10分钟或煮沸1分钟死亡。但对寒冷、干燥和日光的抵抗力较其他无芽胞菌强。在衣服、床单、玩具上可存活数天至数周。对常用消毒剂抵抗力较弱，5%石碳酸1分钟、3%来苏尔10分钟处理可杀灭。对青霉素、氯霉素、红霉素等敏感。 棒状杆菌与疾病 常用种属鉴定靶点及序列比对 种属鉴定靶点的选定 16S序列比对 选取白喉棒状杆菌（C.diphtheriae ）等10个种的16S序列进行比对，共计278条序列。 dtxR序列比对 文献中dtxR引物 rpoB序列比对 文献中的棒状杆菌rpoB引物 棒状杆菌毒力因子及序列比对 白喉毒素tox基因比对 文献中白喉毒素tox引物 鞘磷脂酶PLD基因比对 文献中PLD引物 参考文献 [1] Burhan C?etinkayaa,*, Murat Karahana, Eray Atila,et al. Identification of Corynebacterium pseudotuberculosis isolates from sheep and goats by PCR[J]. Veterinary Microbiology 88 (2002) 75–83. [2] Fabiola Mancini , Monica Monaco , Marco Pataracchia ,et al. Identification and molecular discrimination of toxigenic and nontoxigenic diphtheria Corynebacterium strains by combined real-time polymerase chain reaction assays[J]. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease 73 (2012) 111–120. [3] Fabricia P. Pimenta, Gisele A.M. Matias, Gabriela A. Pereira,et al. A PCR for dtxR gene: Application to diagnosis of non-toxigenic and toxigenic Corynebacterium diphtheriae[J]. Molecular and Cellular Probes 22 (2008) 189–192. [4] Luis G. C. Pacheco, Roberta R. Pena, Thiago L. P. Castro,et al. Multiplex PCR assay for identification of Corynebacterium pseudotuberculosis from pure cultures and for rapid de