异毛虫Allotricha curdsi皮层纤毛器基部微管的荧光标记.pdfVIP

第46卷 第6期 复旦学报(自然科学版) Vl01．46 No．6 2007年12月 Journal of Fudan University(Natural Science) Dec．2007 文章编号：0427—7104(2007)06—0976—05 异毛虫Allotricha curdsi皮层纤毛器 基部微管的荧光标记 高 巍，史 磊，顾福康 (华东师范大学生命科学学院，上海200062) 摘 要：FLUTAX直接荧光标记和抗a一微管蛋白抗体免疫荧光标记显示，原生动物腹毛目纤毛虫异毛虫(Az． ~tricha curdsi)细胞微管胞器由口围带、波动膜、额腹横棘毛、左右缘棘毛、背触毛等皮层纤毛器、纤毛器基部附 属微管组成．其中腹面皮层纤毛器基部附属微管包括小膜托架、小膜附属微管、波动膜骨架；额腹横棘毛基部围 棘纤维篮、额腹横棘毛和左右缘棘毛基部前纵微管束、后纵微管束和横微管束，它们以各自的纤毛器基部为中 心，分别向皮层不同方向发射，在细胞皮层内形成一个复合三维结构微管网；并且，左、右缘棘毛基部横微管显示 非镜像对称的图像，横棘毛基部微管前纵微管束向前伸展后其前端并非聚集在一起，这与目前报道的其他腹毛 目纤毛虫如贻贝棘尾虫、魏氏拟尾柱虫同种结构的定位特征不一样． 关键词：腹毛目纤毛虫；异毛虫；纤毛器基部微管；荧光标记 中图分类号：Q 954 文献标识码：A 原生动物纤毛虫含有复杂的皮层细胞骨架结构．早期，应用银浸法L1 J、蛋白银方法[2]及超微结构技术 显示纤毛虫皮层中以纤毛基体为主要成分的骨架结构，探讨皮层纤毛器的形态及其结构形成机理，成为原 生动物学和细胞生物学领域的重要研究内容．从20世纪90年代起，针对微管蛋白的直接荧光标ii2E3-7]与 间接免疫荧光标记L8 J等方法探索纤毛虫细胞的微管胞器及其微管蛋白组分，研究微管胞器的功能，又成 为所在领域的热点．目前，继对膜口类纤毛虫草履虫(Paramecium)、四膜虫(Tetrahymena)等纤毛虫细胞 微管结构研究之后l9-11 J，应用荧光标记方法对体纤毛基体紧密排布、微管胞器更为复杂的腹毛目纤毛虫 贻贝棘尾虫(Stylonychia mytilus)、魏氏拟尾柱虫(Paraurostyla weissei)等纤毛虫中微管类细胞骨架的研 究也取得了初步进展l12-13 J．本文采用荧光紫杉醇(FLUTAx)直接荧光染色以及抗 微管蛋白抗体间接免 疫荧光方法，显示了腹毛目纤毛虫异毛虫Allotricha curdsi皮层纤毛器基部微管，取得了一些迄今未见报 道的结果，现报告如下． 1 材料与方法 1．1 材料 异毛虫于2005年6月采自浙江省双溪景区，分离后，应用麦粒液发酵获得的细菌作为饵料，建立纯系 培养．将纤毛虫培养至较高密度后，取生长状态良好的细胞作为实验材料． 1．2 方法 1．2．1 FLUTAX直接荧光标记 采用本实验室改进的FLUTAX法[H]，主要步骤为：①将材料放人0．5％的皂苷中渗透1 min，用 PHEM清洗一次；②将渗透后的细胞放人4％多聚甲醛中固定30 S，PHEM清洗一次并将细胞转移至涂有 多聚赖氨酸的载玻片上；③0．2％Triton X一100处理30 S，PHEM清洗一次；④1 ymol／i．FLUTAX一2染色 收稿日期：2007—06—30 基金项目：国家自然科学基金资助项目 作者简介：高 巍(1982一)，男，硕士研究生；通讯联系人顾福康，男，教授，E-mail：fkgu~bio．e叽u．edu．crl 第6期 高 巍等：异毛虫Allotricha curdsi皮层纤毛器基部微管的荧光标记 10 rnin,0．01 mol／L的PBS漂洗，盖片．Olympus Bx荧光显微镜观察，Cool SNAP—Pro数码相机照相． 1．2．2 抗a一微管蛋白抗体免疫荧光标记 采用本实验室报道的方法[ ]，主要步骤为：①将材料放入5％皂苷渗透2 min，PHEM清洗一次；② 4％多聚甲醛固定1 h；③将材料用0．1％的Triton-X100缓冲液处理13～15 m