产肠毒性大肠杆菌DPOPCR检测方法的建立与应用.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３３（１１）：７５８０ 产肠毒性大肠杆菌ＤＰＯＰＣＲ检测 方法的建立与应用 １ ３ １ ２ １ 徐义刚 　李丹丹 　刘忠梅 　崔丽春 　李苏龙 （１黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心　哈尔滨　１５０００１　２东北林业大学研究生院　哈尔滨　１５００４０） （３海南出入境检验检疫局检验检疫技术中心　海口　５７０１２５） 摘要　双启动寡核苷酸引物（ｄｕａｌｐｒｉｍｉｎｇｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ，ＤＰＯ）是一种新型的引物设计方法，具有 设计简易、特异性强以及退火温度范围宽的特点。以产肠毒性大肠杆菌ＬＴ基因为靶基因，设计 ２＋ 了一对ＤＰＯ引物，经过对ＴａｑＤＮＡ聚合酶、Ｍｇ 、ｄＮＴＰ反应体系因子的优化，建立了产肠毒性大 肠杆菌ＤＰＯＰＣＲ检测方法，测定了该方法的灵敏度、特异性以及退火温度不敏感性。结果显示，