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免疫佐剂及其研究进展 摘要： 免疫佐剂是指与抗原同时或预先应用，能增强机体针对抗原的免疫应答能力或改变免疫反应类型的物质。1925年，法国兽医免疫学家Ramon首先观察到在疫苗中加入某些与之无关的物质可以特异地增强机体抵抗反应。1926年，Glenny最先将铝化合物作为免疫佐剂应用于白喉外毒素疫苗。1951年，Freund将液体石蜡与羊毛脂（乳化剂）按一定比例混合后，加入抗原研制成油包水的乳胶，免疫动物后效果极佳，可产生高效而持久的抗体。1956年，Johnson发现革兰氏阴性细菌的内毒素具有佐剂活性。 目前正在开发的新型疫苗有合成肽疫苗、基因工程疫苗、核酸疫苗、转基因植物口服疫苗等，这些新型疫苗具有良好的抗原特异性和低毒性。但由于其抗原分子小，纯化程度高，疫苗的免疫原性较差，所以需要安全有效的佐剂来增强疫苗的效力。近年来佐剂的发展迅猛，多种新型佐剂层出不穷，人们对佐剂的作用机理亦有更深入的认识。关键词：；免疫应答反应；疫苗；1 免疫佐剂作用机理　　Cox 等提出佐剂增强免疫应答5种可能的机制：免疫调节，抗原提呈，诱导CTL，靶向传递和抗原储存。佐剂增强免疫应答的机制尚未完全阐明，其作用机制包括：①在接种部位形成抗原贮存库，使抗原缓慢释放，延长抗原在局部组织内的滞留时间，较长时间使抗原与免疫细胞接触并激发对抗原的应答。②增加抗原表面积，提高抗原的免疫原性，辅助抗原暴露并将能刺激特异性免疫应答的抗原表位递呈给免疫细胞。③促进局部的炎症反应，增强吞噬细胞的活性，促进免疫细胞的增殖与分化，诱导细胞因子的分泌。2 佐剂的种类2.2.2 油乳佐剂 油乳佐剂中含有油和乳化剂, 它的作用机制是抗原包被在油相形成的微结构内, 使之形成贮存库而缓慢释放, 刺激机体免疫细胞产生抗体。油乳佐剂主要有弗氏佐剂、 佐剂 -65、 白油Span 佐剂、 MF -59 等。弗氏佐剂(Freunda djuvant, FA)分为弗氏完全佐剂(Freund complete adjuvant, FCA) 和弗氏不完全佐剂( Freundin complete adjuvant, FIA) 两种。FIA 是由低黏度的矿物油及乳化剂组成的一种贮藏性佐剂; FCA 是在不完全佐剂的基础上加一定量的分枝杆菌而成。FCA 是细胞免疫的强刺激剂, 而FIA 则仅能刺激体液免疫。FCA 和 FIA 主要不足之处: 可引起局部肉芽肿和无菌性脓肿; 使用矿物油佐剂的小鼠曾发生肿瘤, 因此可能有致癌问题; 稳定性差, 难以长期保存; 有对结核菌素致敏等毒副作用, 故仅限用于兽用。佐剂 -65 在体内可被代谢或分泌, 用于人的流感疫苗安全有效, 但较弗氏佐剂效果稍差。白油 Span 佐剂是用轻质矿物油作油相, 用 Span -80 或Span -85 及Tween -80 作为乳化剂制成的油乳佐剂, 是当前兽医生物制品中最常用、 最有效的佐剂之一。MF -59 为水包角沙鲨烯乳剂配方, 由角鲨烯、 Tween -80、 Span -85 等组成, 已广泛用作于各种亚单位疫苗佐剂, 可增强体液免疫应答和细胞免疫应答, 副反应轻微。油乳剂刺激局部产生肉芽肿或炎症反应, 吸引巨噬细胞等聚集, 这些细胞产生大量活性物质, 这些活性物质又增强了体液免疫和细胞免疫。 2.3 脂质体 脂质体是一类以提高抗原输送和递呈为主要作用的佐剂。脂质体由磷脂和固醇类组成的含双层脂质分子的脂质球，其表面为疏水性结构，而内部为亲水性结构。其主要优点是脂质体膜对细胞膜具有很好的亲和性，容易将包被在脂质体上或内部的抗原(或编码抗原的DNA)成分输入到细胞内。目前可以根据要求制备直径不同的脂质球，也可以根据抗原分子的理化特性将抗原分子包被在脂质体的不同部位，如将含疏水性氨基酸较多的抗原插入脂双层中，而将含亲水性基团较多的抗原包裹在脂质球的中间区。脂质体疫苗可经黏膜免疫。脂质体膜与细胞膜的亲和性，非常有利于将包被的抗原递呈给抗原递呈细胞(Antigen presenting cells， APC)，并使抗原被溶酶体所降解，进而通过MHC和MHC途径递呈给免疫系统，同时激发细胞和体液免疫应答反应。脂质体在制备过程中要求一定的技术性，其费用也较其他免疫佐剂高，目前对脂质体的应用研究还主要集中在医学研究方面，在兽医疫苗研究上的应用前景还具有一定的不确定因素。 2.4 微生物来源佐剂 CpG DNA CpG DNA是指一类序列中大部分以非甲基化胞嘧啶核苷酸和鸟嘌呤核苷酸(CpG)为基元的寡聚体。可激活T细胞、B细胞、NK细胞等多种免疫效应细胞，又称为免疫刺激DNA序列(ISS)。CpG DNA主要存在于细菌源性的DNA中，能促进B细胞增殖分化并分泌IL-6，从而诱导I