TFPI-2参与SH-SY5Y细胞化学缺氧调控机制的研究.pdfVIP

目 录 中文摘要 ….…………………………………………………………1 英文摘要 ..………………………………………………………………4 英文缩写 ..………………………………………………………………8 研究论文 TFPI-2 参与SH-SY5Y 细胞化学缺氧调控机制的研究 前言 …………………………………………………………………9 材料与方法 ………………………………………………………...11 结果 ………………………………………………………………...23 附图 ………………………………………………………………...25 附表 ………………………………………………………………...32 讨论 ………………………………………………………………...35 结论 ………………………………………………………………...38 参考文献 …………………………………………………………... 39 综述 microRNA 与脑缺氧损伤……………………………………... 42 致谢 ……………………………………………………………………53 个人简历 ……………………………………………………………….54 万方数据 中 文 摘 要 TFPI-2 参与SH-SY5Y 细胞化学缺氧调控机制的研究 摘 要 目的：缺氧损伤见于多种中枢神经系统疾病，如脑梗死、脑出血、脑 肿瘤、高原脑水肿等等。研究发现，缺氧可以引起脑部一系列功能蛋白和 基因表达的变化，如脑红蛋白等等。其中缺氧诱导因子（hypoxia-inducible factor，HIF ）是目前已知的介导缺氧过程最重要的核转录因子，可以调控 上百种基因的表达。HIF 调控的缺氧通路广泛参与能量代谢、细胞周期调 节、血管生成、细胞凋亡和肿瘤侵袭等病理过程，是缺氧过程中重要的调 控因子。到目前为止，脑缺氧损伤的机制和调控通路并不完善，探索脑缺 氧损伤新的调控因子，进一步完善缺氧通路，可以为我们提供神经保护的 新靶点，对于脑部缺氧性疾病的预防和治疗具有重要意义。 为寻求新的缺氧相关标志性因子，本课题组利用基因芯片及 miRNA 芯片等技术对低压缺氧大鼠脑皮质进行差异因子的检测，发现了 TFPI-2 和miR-92a-2 这两个具有靶向关系的差异表达因子，其中 TFPI-2 表达与 缺氧呈正相关，miR-92a-2 则相反。组织因子途径抑制物-2 （tissue factor pathway inhibitor-2 ，TFPI-2 ）是一种天然的抗凝因子，是内源性TF 抑制 物，属Kunitz 型丝氨酸蛋白酶抑制家族。TFPI-2 是一种广谱丝氨酸蛋白 酶抑制剂，可以抑制包括纤溶酶、基质金属蛋白酶等在内多种蛋白酶的活 性，维持细胞外基质的完整性。研究发现，TFPI-2 参与多种恶性肿瘤的 转移和侵袭过程，与肿瘤组织血管生成、细胞凋亡等过程密切相关。但是 TFPI-2 在缺氧过程中的变化及调控机制没有得到充分研究，TFPI-2 是否 通过HIF 经典途径参与细胞缺氧损伤也并不清楚。 氯化钴是常用的细胞化学缺氧诱导剂，可抑制HIF-1α 降解，激活HIF 缺氧通路，模拟细胞缺氧环境。本实验拟通过建立SH-SY5Y 人神经母细 胞瘤细胞氯化钴化学缺氧细胞损伤模型，探究TFPI-2 在SH-SY5Y 人神经 母细胞瘤细胞缺氧损伤中的变化及可能的调控机制。 方法: 1 CoCl 缺氧对SH-SY5Y 细胞活性和形态的影响 2 1.1 培养SH-SY5Y 细胞，加入不同浓度CoCl2 （0、100、200 、400 μmol/L ）