Wnt经典信号通路在慢性氟中毒大鼠骨骼损伤中作用机制的研究.pdfVIP

贵阳医学院2012 届硕士研究生论文 Wnt 经典信号通路在慢性氟中毒大鼠骨骼损伤中作用机制的研究 专业：病理学与病理生理学 姓名: 陈锡山 导师: 于燕妮 教授 易韦 教授 摘 要 目的 通过研究慢性氟中毒大鼠成骨细胞中Wnt3a 和β-catenin 蛋白及其 mRNA 表达水平的变化，初步探讨Wnt 经典信号通路在氟骨症发生机制中的作用。 方法 利用饮水加入不同浓度 （5mg/L 和50mg/L）氟化钠（NaF）进行大鼠 染氟实验，同时设置正常组，实验期8 个月。实验中观察大鼠氟斑牙的发生情况， 使用电极选择法测定尿氟及骨氟含量。确定慢性氟中毒模型的复制成功。HE （Hematoxylin-eosin，苏木素-伊红）染色观察股骨骨组织的形态学变化；ELISA （Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay, 酶联免疫吸附法）检测大鼠血清中 BALP 含量（Bone Alkaline Phosphatase ，骨碱性磷酸酶）和 TRACP-5b （tartrate-resistant acid phosphataseform5b, 抗酒石酸酸性磷酸酶）含量； IHC （Immunohistochemistry, 免疫组织化学）方法检测股骨成骨细胞Wnt3a 和 β-catenin 蛋白表达水平；ISH （in situ hybridization，原位杂交）方法检 测股骨成骨细胞Wnt3a 和β-catenin mRNA 表达水平。 结果 1、染氟大鼠出现不同程度氟斑牙损害，以高氟组最为严重，对照组 无氟斑牙发生，各组间差异有统计学意义（P0.05）；尿氟及骨氟含量随染氟浓 度的增加而逐渐增加；表明慢性氟中毒大鼠模型复制成功。 2、 HE 结果显示慢性氟中毒大鼠骨密度增加，与正常组比较，差异有统计学意 义（P0.05），表现为骨皮质增厚，骨小梁增宽、排列紧密。骨密度随着氟浓度 升高而增加。 3、ELISA 检测结果显示在氟中毒组BALP 升高，与正常组比较，差异有统计学意 义（P0.05）；与低氟组比较，高氟组含量升高，差异有统计学意义（P0.05）。 与正常组比较，低氟组TRACP-5b 含量增加显著，差异有统计学意义（P0.05）； 高氟组与对照组比较无统计学意义 （P0.05），但与低氟组比较，TRACP-5b 含量 降低，差异有统计学意义（P0.05）。 2 贵阳医学院2012 届硕士研究生论文 4、免疫组化实验结果显示，氟中毒组 Wnt3a 蛋白和β-catenin 蛋白表达均升 高，与正常组比较，差异有统计学意义（P0.05）；高氟组 Wnt3a 蛋白质和β -catenin 蛋白表达高于低氟组表达，差异有统计学意义（P0.05）；统计Wnt3a 蛋白和β-catenin 蛋白表达相关性，Wnt3a 蛋白随着β-catenin 蛋白两者的表 达正相关性（R =0.856， P0.05）。 5、原位杂交法实验结果显示，氟中毒组Wnt3a mRNA 和β-catenin mRNA 表达均 升高，与正常组比较，差异有统计学意义（P0.05）；高氟组 Wnt3a mRNA 和β -catenin mRNA 表达高于低氟组表达，差异无统计学意义（P0.05）。 结论：过量氟可影响的大鼠骨组织的Wnt3a 和β-catenin 在成骨细胞的表 达升高，进而通过调节Wnt 经典信号通路中相应的靶基因增强成骨作用，这可能 是氟骨症中成骨活跃和骨转换加速的发病机制之一。 关键词：氟中毒；Wnt；Wnt3a ；β-catenin；成骨细胞 3 贵阳医学院2012 届硕士研究生论文 前 言 地方性氟中毒是在特定的地理环境中发生的一种生物地球化学性疾病，是由 于长期生活在高氟环境中而摄入含氟量高的饮水、食物和空气，导致人体中氟元