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‘黄花水仙2号’三个WD40相关基因克隆及表达分析.pdf

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‘黄花水仙2号’三个WD40相关基因克隆及表达分析

独创性声明 本人声明,所呈交的学位(毕业)论文,是本人在指导教师的指导下独立完 成的研究成果,并且是自己撰写的。尽我所知,除了文中作了标注和致谢中已作 了答谢的地方外,论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本 研究做出贡献的同志,都在论文中作了明确的说明并表示了谢意,如被查有侵犯 他人知识产权的行为,由本人承担应有的责任。 学位(毕业)论文作者亲笔签名: 日期: 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位(毕业)论文的规定,即学 校有权送交论文的复印件,允许论文被查阅和借阅; 学校可以公布论文的全部或 部分内容,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 保密,在 年后解密可适用本授权书。 □ 不保密,本论文属于不保密。 □ 学位(毕业)论文作者亲笔签名: 日期: 指导教师亲笔签名: 日期: 目 录 摘要 i ABSTRACT iii 缩写词 v 第一章 引言 1 1 中国水仙的基因工程研究概述 1 2 植物中WD40 蛋白的研究进展 1 2.1 WD40 蛋白的结构 2 2.2 WD40 蛋白与植物花青素苷生物合成及调控 3 2.3 WD40 蛋白与植物非生物胁迫响应 4 2.4 WD40 蛋白与植物发育 5 3 TOPLESS 蛋白的研究进展 6 3.1 Gro/Tup1 共抑制子家族 6 3.2 TOPLESS 蛋白 8 4 本研究的目的和意义 9 第二章 材料和方法 10 1 实验材料 10 1.1 植物材料 10 1.2 试剂和酶 10 1.3 载体、菌株和培养基 11 1.4 测序及引物合成 11 1.5 主要仪器、设备和耗材 11 2 实验方法 11 2.1 黄花水仙2 号组培苗制备 11 2.2 非生物胁迫实验 12 2.3 总RNA 提取 13 2.4 RNA 质量检测 13 2.5 RACE 实验 14 2.6 实时荧光定量PCR 实验 16 第三章 结果与分析 18 1 黄花水仙2 号WD40 蛋白家族基因序列分析 18 1.1 RACE 实验总RNA 质量 18 1.2 NtWD1 的克隆与分析 19 2 黄花水仙2 号WD40 蛋白家族基因表达水平分析 28 2.1 qPCR 实验总RNA 质量 28 2.2 黄花水仙2 号NtWD1、NtWD2 、NtWD3、NtWD40 在不同组织器官的 表达分析 29 2.3 黄花水仙2 号NtWD1、NtWD2 、NtWD3、NtWD40 在不同的非生物逆 境中的表达分析 30 第四章 总结与展望 36 1 本研究主要创新点 36 2 存在的主要问题 36 3 讨论及展望 36 参考文献 39 附录I 差减文库中筛选出的3 个基因片段 46 附录II NtWD1 两端RACE 及ORF 扩增的测序结果 47 附录III NtWD1 编码的氨基酸序列 50 附录IV ClustalX 聚类分析结果 51 附录V qPCR 样品的OD 值 61

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