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‘黄花水仙2号’三个WD40相关基因克隆及表达分析
独创性声明
本人声明,所呈交的学位(毕业)论文,是本人在指导教师的指导下独立完
成的研究成果,并且是自己撰写的。尽我所知,除了文中作了标注和致谢中已作
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研究做出贡献的同志,都在论文中作了明确的说明并表示了谢意,如被查有侵犯
他人知识产权的行为,由本人承担应有的责任。
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保密,在 年后解密可适用本授权书。 □
不保密,本论文属于不保密。 □
学位(毕业)论文作者亲笔签名: 日期:
指导教师亲笔签名: 日期:
目 录
摘要 i
ABSTRACT iii
缩写词 v
第一章 引言 1
1 中国水仙的基因工程研究概述 1
2 植物中WD40 蛋白的研究进展 1
2.1 WD40 蛋白的结构 2
2.2 WD40 蛋白与植物花青素苷生物合成及调控 3
2.3 WD40 蛋白与植物非生物胁迫响应 4
2.4 WD40 蛋白与植物发育 5
3 TOPLESS 蛋白的研究进展 6
3.1 Gro/Tup1 共抑制子家族 6
3.2 TOPLESS 蛋白 8
4 本研究的目的和意义 9
第二章 材料和方法 10
1 实验材料 10
1.1 植物材料 10
1.2 试剂和酶 10
1.3 载体、菌株和培养基 11
1.4 测序及引物合成 11
1.5 主要仪器、设备和耗材 11
2 实验方法 11
2.1 黄花水仙2 号组培苗制备 11
2.2 非生物胁迫实验 12
2.3 总RNA 提取 13
2.4 RNA 质量检测 13
2.5 RACE 实验 14
2.6 实时荧光定量PCR 实验 16
第三章 结果与分析 18
1 黄花水仙2 号WD40 蛋白家族基因序列分析 18
1.1 RACE 实验总RNA 质量 18
1.2 NtWD1 的克隆与分析 19
2 黄花水仙2 号WD40 蛋白家族基因表达水平分析 28
2.1 qPCR 实验总RNA 质量 28
2.2 黄花水仙2 号NtWD1、NtWD2 、NtWD3、NtWD40 在不同组织器官的
表达分析 29
2.3 黄花水仙2 号NtWD1、NtWD2 、NtWD3、NtWD40 在不同的非生物逆
境中的表达分析 30
第四章 总结与展望 36
1 本研究主要创新点 36
2 存在的主要问题 36
3 讨论及展望 36
参考文献 39
附录I 差减文库中筛选出的3 个基因片段 46
附录II NtWD1 两端RACE 及ORF 扩增的测序结果 47
附录III NtWD1 编码的氨基酸序列 50
附录IV ClustalX 聚类分析结果 51
附录V qPCR 样品的OD 值 61
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