一个遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症家系的基因与表型分析.pdfVIP

中 文 摘 要 一个遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症家系的基因与表型分析 摘 要 目的：遗传性凝血因子Ⅶ缺乏症是由于凝血因子Ⅶ （FⅦ）基因（F7 基因）先天性缺陷导致FⅦ功能减低，干扰外源性凝血途径的起始阶段， 导致临床出血症状，该病为常染色体隐性遗传性疾病，由FⅦ基因(F7)突 变导致。遗传性凝血FⅦ缺乏症以出血症状、凝血酶原时间延长而部分凝 血活酶时间正常以及因子FⅦ活性降低为特点。纯合子者FⅦ活性较低， 出血较重，新生儿期即可发病。该病发病率极低，在 1/50 万左右，男女 均可发病。Alexander 等在1951 年首次报道，约18%患儿的双亲为近亲结 婚。编码FⅦ蛋白的F7 基因位于13 号染色体长臂 （13q34）紧靠凝血因 子X 基因上游2.8kb 的位置，长度为12850bp，mRNA 长3141 bp，cDNA 长2462 bp ，由9 个外显子和8 个内含子组成。FⅦ是依赖维生素K 的单 链糖蛋白，是由406 个氨基酸残基组成的，在肝脏中合成，肾脏也可以储 存和合成，FⅦ能被血循环中的纤维蛋白原及其降解产物刺激合成，分子 量为45078 ，N 端为γ-羧基谷氨酸残基，C 末端为谷氨酸残基，系丝氨酸 蛋白酶结构域，整个分子分4 个结构域，从C 末端起分别为一个催化区、 两个表皮生长因子（EGF ）区和γ-羧基谷氨酸残基。临床上根据FⅦ抗原 和活性水平将遗传性FⅦ缺陷分为三类：交叉反应物质阳性（cross reacting + - material CRM ）、交叉反应物质阴性（CRM ）与交叉反应物质降低 （CRMR ）。该病的临床表现呈多样化，有的终生未出现出血表现，有的 出现严重出血，甚至颅内出血，其基因突变类型与FⅦ活性、抗原水平与 临床出血表现无明显相关性。 目前，纳入人类基因突变数据库(2014 年2 月) 的FⅦ相关突变有283 种,突变类型有 6 种，包括错义、启动子、剪切位点、无义、小的插入和 缺失突变，其中错义突变占70%，缺失突变占10%，剪切位点突变占9%， 启动子突变占6%， 其余为一些小的插入突变和无义突变。F7 基因数据 库的完善和新的遗传家系的发现，对该病遗传性的诊断、基因治疗及预后 判断等具有重要意义。本研究对1 例遗传性FⅦ缺陷症患者及其家系成员 F7 基因进行检测，观察基因突变与临床表型的关系，探讨其功能异常的 1 万方数据 中 文 摘 要 分子机制。 方法： 1 家系及临床资料 先证者为 20 岁女性，为行扁桃体炎手术,于门诊 查凝血常规时发现PT 延长，体格检查：皮肤粘膜未见出血点及瘀斑，心 肺腹无异常。平素体健，无明显出血倾向，无抗凝药物等应用史。实验室 检查：血常规、肝功能、乙肝五项均正常。家系成员为患者父母，均无皮 肤、牙龈出血或轻度外伤出血不止等出血倾向，父母非近亲婚配，无血缘 关系。 2 标本采集：对患者及征得患者及其家属同意后，采集患者及其父母 的外周静脉血标本，以0.109mol/L 构橼酸钠按 1:9 抗凝，3000r/min 离心 后，分离血细胞和血浆，留取血浆，标本分成 2 份，-80℃保存，一份用 于凝血指标检测；另一份用于基因组DNA 提取和PCR 扩增。 3 血浆凝血指标检测：凝血酶原时间（PT ）检测、活化部分凝血活 酶时间 (APTT)检测、纤维蛋白原（Fg ）以及凝血因子Ⅱ活性F Ⅱ、F Ⅴ、 FⅦ、F Ⅹ活性检测。 4 引物设计：PCR 及测序引物共 12 对，根据FⅦ基因序列（Genbank J02933 ），应用Primer5 软件分别设计了12 对引物以覆盖F7 基因的所有