三氧化二砷对原代培养海马神经元凋亡的实验研究.pdfVIP

贵阳医学院2014 届硕士研究生论文 三氧化二砷对原代培养海马神经元凋亡的实验研究 专业名称：人体解剖与组织胚胎学 研究生：宋斌 指导老师：余资江教授 【摘要】目的：采用流式细胞术和蛋白印迹法观察砷对原代培养海马神经元是否 发生凋亡，及其作用机制。方法：1、离体培养新生24h 内SD乳鼠海马神经元，每 天在倒置相差显微镜下进行神经元的形态学观察；2 、MTT 法检测培养不同时间 段神经元的活力变化，并绘制生长曲线；3 、离体培养新生24h 内SD乳鼠海马神经 元，取纯化培养9d神经元利用免疫荧光染色法检测β-tublin Ш的表达率；4 、离体 培养新生24h 内SD乳鼠海马神经元，取培养2 、4 、8 、12、16、20 、24d 海马神经 元，蛋白印迹法检测MAP-2蛋白的表达变化；5 、以不同浓度三氧化二砷（0、10 μ mol/L 、50 μmol/L 、100 μmol/L 、200 μmol/L ）染毒24 小时，MTT 法检测不同浓度染 毒组对神经元活力的影响；6 、流式细胞仪（Annexin V-FITC/PI双染法）定量分 析各实验组凋亡率；7 、测定各组神经元中超氧化物歧化酶( SOD) 、乙酰胆碱酯