第2章高效液相色谱法概要1.pptVIP

高效液相色谱法(HPLC) 高效液相色谱法是20世纪70年代发展起来的一项高效快速的分离分析技术.液相色谱法是指流动相为液体的色谱技术.在经典的液体柱色谱法的基础上,引入了气相色谱法的理论,在技术上采用了高压泵(一般在150-350×105 Pa),高效固定相和高灵敏度(ng,pg级)的检测器,实现了分析速度快,分离效率高和操作自动化. 主要特点: 高压: 一般在150-350×105 Pa 高速: 一般在1 h之内完成分析 高效: GC 2000塔板/米; LC 30000塔板/米 高灵敏: 10-9 g ng 10-11g pg 色谱原理 色谱原理 色谱原理--分离过程 色谱参数 --保留值 色谱参数--容量因子、选择性、相对保留值 色谱参数--柱效 色谱参数—分离度和分离效能总指标 Size Exclusion Chromatography Size Exclusion Chromatography  Ion Exchange Chrom Ion Exchange Chrom Ion Exchange Chrom Affinity  Chromatography Affinity Chromatography Hydrophobic interaction Chromatography Hydrophobic Interaction Chromatography Reversed Phase Chromatography Reversed Phase Chromatography Comparison between RPC and HIC Comparison between RPC and NPC 液相色谱固定相 1 、液液色谱法及离子色谱法固定相 全多孔型担体 表面多孔型担体 化学键合固定相 Si-O-C Si-O-Si-C Si-C Si-N Si-O-Si-C化学键稳定，耐水、耐热、耐有机溶剂 ， 化学键合固定相具有的特点： 1）表面没有液坑，比一般液体固定相 传质快。 2）无固定液流失，增加了色谱柱的稳 定性和寿命。 3）可以键合不同官能团，能灵活的改 变选择性 4）有利于梯度洗涤，有利于配用灵敏 检测器和馏分的收集 4 空间排阻色谱固定相 软质凝胶 葡聚糖凝胶 琼脂糖凝胶 水为流动相 半硬质凝胶 苯乙烯-二乙烯基苯交联共聚凝胶(交联聚苯乙烯凝胶) 适用于非极性有机溶剂 ,丙酮 乙醇等极性溶剂不能用. 硬质凝胶 多孔硅胶 多孔玻璃珠等 液相色谱流动相 GC N2 H2 He LC 流动相的种类,流动相的配比能显著 影响分离效果. 流动相选择: 1)流动相纯度 AR 2)应避免使用会引起柱效损失或保留特性 变化的溶剂 3)对样品要有适宜的溶解度 4)溶剂的黏度小一些为好 5)应与检测器相匹配 常用溶剂的极性顺序: 水(极性最大),甲酰胺,乙腈,甲醇,乙醇,丙醇,丙酮,四氢呋喃,甲乙酮,正丁醇,乙酸乙酯,乙醚,二氯甲烷,氯仿,溴乙烷,苯,甲苯,四氯化碳,二硫化碳,环己烷,己烷,庚烷,煤油, 石油醚(极性最小). 为了获得合适的溶剂强度(极性),常采用二元或多元组合的溶剂体系作为流动相. 采用的溶剂可分为底剂及洗脱剂两部分 底剂决定基本的色谱分离, 洗脱剂具有对组分选择性分离 正相色谱中底剂采用低极性溶剂,洗脱剂选择极性较强的溶剂. 反相色谱中底剂采用强极性溶剂(水),洗脱剂选择极性较弱的溶剂(有机溶剂). 离子交换色谱主要在含水介质中进行,组分保留值可以用流动相中盐的浓度和 pH来控制,增加盐的浓度导致保留值降低,由于流动相离子与交换树脂相互作用力不同,因此流动相中离子类型对样品组分的保留值有显著影响. 一般阴离子的滞留次序为: 柠檬酸离子＞SO4 ＞草酸离子