茯苓二藤汤对急性痛风性关节炎大鼠踝关节软骨NF-κBp65表达的影响及防治痛风的研究.pdfVIP

茯苓二藤汤对急性痛风性关节炎大鼠踝关节软骨 NF-κBp65 表达的 影响及防治痛风的研究 专业：肾病风湿 研究生：方国虎 导师：李龙、黄朝晖教授 摘 要 目的：1.研究茯苓二藤汤对急性痛风性关节炎发病中 NF- κBp65 信号通路的影 响，为进一步探讨茯苓二藤汤防治痛风提供理论依据；2.为开发民族药品，带来 较大的经济效益和社会效益。方法：将50 只雄性SD 大鼠随机分为5 个组，每组 10 只，分别是正常组(N组)，模型组（M 组），秋水仙碱组（Q 组），低剂量药物 治疗组（DD 组），高剂量药物治疗组（GD 组）。除正常组外，各组MSU （尿酸钠） 溶液（20mg/ml，50ul/只）右后肢踝关节腔内注射制造急性痛风性关节炎模型。 以对侧鼓起为注入标准。造模前1 小时，造模后 1、4、12、24、48 小时测定该 踝关节周径，计算关节肿胀指数。各组于造模之前3 天开始灌胃，其中正常组和 模型组给予3ml 生理盐水灌胃，其余组相应给予秋水仙碱、低剂量药物、高剂量 药物。连续灌胃5 天(2次/天)，第5 天灌胃2 小时后处死大鼠，取右后肢踝关 节组织。HE 染色观察各组观察右后支踝关节软骨病理变化，western blot 、免 疫组化测NF- κBp65 表达。结果：结果表明，模型组大鼠关节肿胀指数明显高于 其他组。HE 染色模型组可见关节软骨和周围软组织的水肿程度和炎症细胞浸润 程度明显高于其他组。药物组（包括秋水仙碱组、低剂量药物组、高剂量药物组） 炎症反应较模型组明显改善。western blot 结果表明：模型组NF- κBp65 表达 量最高，正常组表达最少，秋水仙碱组与高剂量药物组较模型组表达明显下调 （P0.05）。秋水仙碱组与高剂量药物组，低剂量药物组NF- κBp65 表达差异无 统计学意义(P0.05)。免疫组化结果表明，药物组（包括秋水仙碱组、低剂量药 物组、高剂量药物组）NF- κBp65 阳性标记指数明显较模型组明显下调（P0.05）， 但三组之间比较无统计学意义(P0.05)。结论：茯苓二藤汤可减轻痛风大鼠模型 关节肿胀程度，减轻关节软骨及软组织炎症程度，下调炎症信号通路中关键因子 NF- κBp65 的表达量，表明本方剂有抑制模型大鼠急性痛风关节炎症发作的重要 作用；同时提示茯苓二藤汤缓解大鼠急性痛风性关节炎关节病情可能与下调NF- κBp65 有关。 关键词：茯苓二藤汤；秋水仙碱；急性痛风性关节炎； NF- κBp65。 2 1前 言 痛风是由于体内嘌呤代谢障碍引起的尿酸产生增多，或尿酸排泄障碍导致高 尿酸血症形成，尿酸钠反复在组织器官沉积，引起体内炎症反应，炎症介质释放， 导致关节软骨及组织器官的急慢性损害。痛风是一个古老疾病，随着我们的经济 发展，人民生活水平及社会富裕程度的提高，饮食结构的改变，痛风的患病率反 [1] 而逐渐增加。余俊文等 对广东佛山市7403 名当地20 岁以上的居民调查发现： 当地居民的痛风患病率为 1.04％，标化率为1．08％；其中男性为1．73％，女 性为 0．39％。因此，痛风越来越受到国内外医学界的重视。痛风的发病主要是 血中血尿酸增高，带来三个方面的危害：（1）关节剧痛，关节破坏，严重者残疾； （2）尿路结石；（3）间质性肾炎，严重者出现肾衰竭。近年来痛风发病的特点是： 发病人数越来越多，发病年龄越来越年轻。痛风严重威胁人民群众的健康。 NF- κB是Rel蛋白家族中的一组转录因子，是由多肽链P50和p65二个蛋白亚 基组成的同源或异源性二聚体，是一个经典的炎症信号通路。在许多基因的启动 子和增强子中都存在功能性NF—KB的结合位点κB序列，且活化的NF—κB能与 DNA链上的特定序列结合，启动和调节众多与炎症免疫反应有关的细胞因子和炎 症介质的基因转录及调控。核因子NF-κB可以诱导表达多种靶基因，如多种炎症 细胞因子、趋化因子、粘附分子等。NF-κB活化后可增强TNF- α、IL-1、IL-6等 [2-3] [4] 产生和释放增多，导致炎症信号进一步放大 。Grove M等 研究发现巨噬细胞 炎