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第 30 卷第 6 期 高 校 化 学 工 程 学 报 No.6 Vol.30 2016 年 12 月 Journal of Chemical Engineering of Chinese Universities Dec. 2016 文章编号：1003-9015(2016)06-1328-07     网络出版地址：/kcms/detail/33.1141.TQ1645.002.html 基于中心组合设计和响应面分析的血清替代物浓度优化 陈小东, 蔡海波, 谭文松 (华东理工大学 生物反应器工程国家重点实验室, 上海 200237 ) 摘 要：细胞因子诱导杀伤细胞(Cytokine-induced killer cells，CIK cells)是一类广泛应用的肿瘤过继免疫疗法的效应细 胞，其体外扩增过程中常需要使用无血清培养基。今以胰岛素、亚麻酸、胆固醇和乙醇胺4 种可替代血清促进细胞扩 增的组份为研究对象，采用中心组合设计和响应面分析相结合的方法，考察上述组分的浓度以及相互作用对单个核细 胞扩增的影响，得到了可支持单个核细胞扩增的最优浓度，分别为 10、5.66、19.86 和 1.22 mgL1 。将上述4 种组分 以优化的浓度添加到DMEM/F12 和IMDM 以1:1 体积比混合而成的基础培养基中，制成无血清培养基Optimizer 。以 含 10% FBS 的RPMI 1640 为对照，采用半量稀释法培养脐血单个核细胞，以培养14 天的总细胞扩增倍数、细胞组成、 CD3+ + CD56 细胞扩增倍数以及对K562 细胞的杀伤活性为指标，评价了制成的无血清培养基Optimizer 支持CIK 细胞扩 增的效果。结果显示，采用所制备的无血清培养基 Optimizer ，总细胞扩增倍数为 56.54±18.87 ，明显高于 SFM1 的 + 5.14±1.03(p 0.05)和SFM2 的3.59±0.56(p 0.05) ，与含10%FBS 的RPMI 1640 的35.24±20.92(p 0.05)接近；CD3 细胞 + + 为97.98%±1.41%，与含10% FBS 的RPM I1640 的94.34%±1.29%相当(p 0.05) ；尽管CD3 CD56 细胞比例18.17%±7.38% + + 低于含 10% FBS 的RPMI 1640 中的数值25.49%±3.35%(p 0.05) ，但两种培养基的CD3 CD56 细胞扩增倍数分别为 440.86±222.89 和429.27±249.16 ，没有显著性差异(p 0.05) ；当效靶分别为9:1 时分别采用两种培养基扩增的细胞对K562 细胞的杀伤活性均能达到50% 以上。该研究结果为用于CIK 细胞体外扩增的无血清培养基的开发提供了依据。 关键词：细胞因子诱导杀伤细胞；无血清培养基；血清替代