第七章 嗅鞘细胞介绍.doc

嗅鞘细胞 简介 嗅鞘细胞是目前所发现的极少数中枢神经系统可以再生的细胞之一。其特点为终身具有神经再生功能,还能够释放多种神经营养因子、神经粘附分子,被认为是髓鞘化能力最强的胶质细胞。逐渐用于治疗脊髓损伤。嗅鞘细胞与胶质细胞、许旺细胞在表现型上有共同点，它们都能促进轴突的再生，主要区别在于嗅鞘细胞不但存在于中枢神经系统，也存在于外周神经中。嗅黏膜中的神经元是唯一生后才生长并在成年时继续分化的神经元，寿命为4～12周，随着新细胞的生长，又建立了新的神经支配关系。嗅鞘细胞存在于嗅神经及嗅球的神经层上，沿嗅神经的全长，从周围神经系统到中枢神经分布。 分化来源 OECs和嗅上皮均来源于嗅基板，而嗅球与其它中枢神经系统结构均起源于神经管，因此在胚胎发育过程中嗅上皮与嗅球发育是两种不同的方向，原始嗅觉神经元伴随大量基板细胞从嗅上皮传出轴突向端脑泡方向迁移，其中嗅鞘细胞引导嗅神经轴突到达端脑泡，这些细胞形成早期的嗅球，接着嗅球发生外翻，迁移细胞覆在其表面形成一薄层，接着它们穿透胶质界膜引导形成嗅神经层和小球层，成为覆盖在嗅球表面新的胶质界膜，不同于中枢神经系统和其它组织的是：在成人阶段嗅鞘细胞依然可穿过这种胶质界膜。 主要特性 嗅鞘细胞是一种嗅神经的支持细胞，它包被神经轴突迁徙入脑，在颅底它和嗅球的僧帽细胞相结合。分布于嗅神经的全长，从嗅上皮基底膜一直到嗅球，主要位于嗅神经的纤维层，至于是否深入到颗粒层仍存在争议。嗅鞘细胞具有雪旺氏细胞和星形胶质细胞的特性，但总的表现更趋于前者，它有两个独特的特征。第一，它不仅存在于外周神经（雪旺氏细胞），而且存在于中枢神经（星形胶质细胞）；第二，嗅粘膜具有终生再生能力，包括人类的嗅鞘细胞，这种再生是嗅鞘细胞参与高效调控的过程，尽管现在不清楚具体的机制。嗅鞘细胞不同于星形细胞和雪旺氏细胞，但同时兼有这两种细胞的特性，有象雪旺氏细胞有助于轴突生长的作用，但比雪旺氏细胞更能使轴突长距离生长，即具有更强的迁徙性；也有象星形胶质细胞一样对神经元的存活及轴突的生长具有营养作用，但嗅鞘细胞还能够包裹神经元形成髓鞘，支持神经突起的生长。正是这两种特性使得嗅鞘细胞成为神经修复的最佳选择。已发表的53篇关于嗅鞘细胞移植的文章，也强有力的证明了嗅鞘细胞是神经修复的最佳材料。 可塑性 嗅鞘细胞被认为是一种可塑性很高的细胞，它可表现出多种细胞形态和细胞表面标志，在嗅系统发育过程中，嗅鞘细胞根据其在组织定位的不同而有不同的抗原表型，其中P75NTR、GFAP、和O4可标记大部分在体嗅鞘细胞，然而在嗅球外神经层O4阳性嗅鞘细胞仍然可以在P75NTR阳性细胞层内分化成E-NCAM阳性的细胞层，还有一定比率的嗅鞘细胞P75NTR阴性而NY和S100表型为阳性。 体内嗅鞘细胞抗原表型的可塑性决定了其在体外培养形态学和抗原表型的可塑性，已有研究证实纯化的嗅鞘细胞能够分化成两种不同形态及不同表面标记的细胞，即星型胶质细胞样嗅鞘细胞和施万细胞样嗅鞘细胞。星型胶质细胞样嗅鞘细胞为扁平状，表达高水平E-NCAM和GFAP而P75NTR阴性；施万细胞样嗅鞘细胞表达P75NTR，部分为GFAP阳性而E-NCAM阴性。这两种细胞关系并未完全清楚，但是可以肯定它们来源于相同谱系，并且两着之间是相关的。 细胞培养 OECs的培养，由胚胎、新生期、成年大鼠和小鼠的嗅球取材均已见报道。供体组织年龄的不同，培养细胞的性质也有一定的差异。成熟嗅球从外到内可分为以下几层：嗅神经层、小球层、外丛层、僧帽细胞层、内丛层、粒层、髓层和室管膜层。嗅球成鞘胶质细胞包绕嗅神经元的轴突经外周部分进入中枢神经系统，终止于嗅球的嗅神经层和小球层。在手术显微镜下取嗅球的最外两层做培养，可以得到含量较高的OECs。Burry等也曾经进行过嗅球神经元体外培养的研究，他们采用机械方法解离嗅球，但是经过这种机械分散方法，细胞破碎较多，细胞活性差。在体外神经元培养过程中采用胰蛋白酶化学消化和机械消化，并在显微镜下密切观察，可以避免消化不充分和过度，使细胞活性提高。 细胞分离 嗅鞘细胞分离有传统分离法：嗅球置于少量ACSF（人工脑脊液）中(4℃冰浴)，在解剖显微镜下，将位于嗅球最外层的嗅神经层、嗅神经及包被的脑膜轻轻剥下，用ACSF洗2次，组织块用0.125%胰酶(Sigma)37℃消化20min，经胰酶消化的组织块再移至完全培养液(DMEM：胎牛血清=9：1美国GIBCO公司)中，用滴管轻轻吹打组织块使之形成细胞悬液备用。分层消化法：整个嗅球置于0.125%胰酶中，37℃消化15min（不时摇动），取出含有细胞的酶液，终止酶反应。剩余的嗅球再用酶消化，重复以上操作6次，细胞悬液分别收集于6支小试管内备用。直接挤压法：嗅球置于少量ACSF中，用眼科镊子直接将嗅球撕烂、挤压，将剩余的片状组织块转移至另一试