通痹方对糖尿病大鼠神经生长因子基因表达的影响.pdfVIP

· 640· 2生 2 鲞 翅丛璺 Q 丛 ations，2007，Vo1．21．No．6 [文章编号]1006—2440[2007)06—0640—03 通痹方对糖尿病大鼠神经生长因子基因表达的影响 张 晶 顾志峰 余江毅 朱静仪 - (南京白下区建中中医院内科，江苏210000； 南通大学附属医院内分泌科； 江苏省中医院内分泌科) 摘要 目的：评价通痹方对糖尿病大鼠神经生长因子(NGF)的影响。方法：用链尿佐菌素(s1 建立糖尿病大鼠 模型，造模1周后用通痹方治疗，用药4周后观察其对血糖和NGF的影响。结果：糖尿病模型组大鼠血糖升高， 脑NGF mRNA的表达下降；而通痹方治疗组NGF mRNA的表达上调，与糖尿病模型组比差异具有统计学意义fP 0．01)。结论：通痹方能增强糖尿病大鼠NGF mRNA的表达。 关键词 通痹方；糖尿病；神经生长因子；基因表达 中图分类号 R587．1 糖尿病周围神经病变 (diabetic peripheral neu— (江苏省捷达科技公司)。 ropathy，DPN)是糖尿病最常见的慢性并发症之一， 1．4 引物设计与合成 从GenBank查取基因序列。 约有60％的糖尿病患者发生周围神经病变llJ，且随 以Primer5软件设计大鼠NGF及内参G3PD引物各 病程的延长而呈逐渐增加的趋势[21。DPN的特点是 一 对，其序列分别为 B—NGF：上游5-ACCTC— 神经纤维变性引起神经纤维进行性缺失和再生．而 CTFGCCCTFGATG一3 。下游 5 一TGAAGCCCACTG． 神经生长因子nerve growth factor，NGF)为“多向性” GACTAAA一3 ：G3PD：上游5 一GGTGAAGGTCGGT— 分子[31，不仅在神经发育期间对神经元的生长和死亡 GTGAAC一3 ．下游 5，_TYCCCATYCTCAGCCTrGAC 有作用，而且还可促进成年神经的功能维持、结构完 一 3 。扩增片段大小分别为372bp和200bp。上述引物 整以及损伤后再生。我们曾将通痹方用于糖尿病神 均由上海生工生物技术服务有限公司合成。 经病变治疗，取得较好的效果。本研究旨在观察通痹 1．5 RNA样品的提取 (1)药物治疗4周末，乙醚 方对糖尿病大鼠NGF mRNA表达的影响。 麻醉，断颈处死大鼠，取脑组织30mg置人匀浆器， 加入lml Trizo1．室温下充分匀浆后倒人1．5ml离心 l 材料与方法 管，静置5min；(2)加入0．2ml氯仿，振荡15s，室温静 1．1动物模型建立及分组 选用SD雄性大鼠40 置5min；(3)4℃，12 000g离心15min后，取上清液至 只，体重200～240g，禁食12h后，用pH 4．2的0．1mol／ 另一1．5ml离心管；(4)~13人0．5ml异丙醇，将管中液 L柠檬酸钠缓冲液在冰浴中新鲜配制20mg／ml的链 体轻轻混匀，室温静置10min；(5)4~C，12 000g离心 脲佐菌素(STZ，Sigma公司)溶液，按STZ 50mg／kg的 10min后弃上清；(6)加入lml 4℃预冷过的75％乙 剂量一次性腹腔注射。72h后由尾静脉采血测定血 醇，轻轻洗涤沉淀，4℃，7 500gx5min，弃上清，同法 糖．凡血糖高于16．7mmol／L者为制模成功，共34