第四章 紫外-可见分光光谱法.ppt

第四章 紫外-可见分光光度法 第一节 紫外-可见分光光度法的 基本原理 一、电磁辐射和电磁波谱 波长为200nm的 光，一个光子的能量是： 三、吸收光谱法和发射光谱法 二、紫外-可见吸收光谱的产生 2．分子吸收光谱的分类： 分子内运动涉及三种跃迁能级，所需能量大小顺序 3．紫外-可见吸收光谱的产生 由于分子吸收紫外-可见光区的电磁辐射，分子中 价电子（或外层电子）的能级跃迁而产生 （吸收能量=两个跃迁能级之差） 三、紫外-可见吸收光谱与分子结构的关系 芦丁含量测定 R带：由含杂原子的不饱和基团的n →π*跃迁产生 C＝O；C＝N；—N＝N— 弱吸收，λmax250~400nm，εmax100 溶剂极性↑，λmax↓ → 蓝移（短移） B带：由π→ π*跃迁产生 芳香族化合物的主要特征吸收带 λmax =254nm，宽带，具有精细结构；εmax=200 极性溶剂中，或苯环连有取代基，其精细结构消失 E带：由苯环环形共轭系统的π→ π*跃迁产生 芳香族化合物的特征吸收带 E1 180nm εmax104 （常观察不到） E2 200nm εmax=7000 强吸收 苯环由发色团取代且与苯环共轭时，E2带与K带合并 一起红移（长移） 电荷转移吸收带：某些无机物和某些有机物混合 而得的分子配合物，在外来辐射激发下强烈吸收 紫外光或可见光，从而获得的可见或紫外吸收带。 乙醇中，将醌与氢醌混合，暗绿色的醌氢醌结晶， 吸收峰在可见光区 配位体场吸收带：指过渡金属水合离子与显色剂 所形成的配合物，吸收适当波长的可见光或紫外光， 从而获得的吸收带。 Ti(H2O)63+水合离子的吸收峰 490nm 四、Lamber-Beer定律（吸收光谱法基本定律) 1.透光度和吸光度 假设一束平行单色光通过一个吸光物体 设断层中所含吸光质点数为dn，不让光子通过的面积ds A值越大，表明物质对光的吸收越大。 3. Lamber-Beer定律 描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系。 4 . 吸光系数：定性定量的依据 （1）吸光系数的物理意义： 单位浓度、单位厚度的吸光度 例1 某溶液用2cm吸收池测量时，T=60%，若改用1cm和3cm吸收池，T和A为多少。 例2 浓度为0.51mg/ml的Cu2+溶液，用环己酮草酰二腙显色后，于波长600nm处用2cm吸收池测量，测得T=50.5%，求吸光系数。 (六) 偏离Beer定律的因素 依据Beer定律，A与c关系应为 经过原点的直线 偏离Beer定律的主要因素表现为 以下两个方面 （1）光学因素 （2）化学因素 （1）光学因素 1）非单色光的影响： Beer定律应用的重要前提——入射光为单色光 第三节 分析条件的选择 （二）显色条件的选择 1.显色剂用量：显色剂用量可通过实验选择，在固定金属离子浓度的情况下，作吸光度随显色剂浓度的变化曲线，选取吸光度恒定时的显色剂用量。 2.酸度：是通过实验来选择显色反应的适宜酸度的。具体做法是固定溶液中待测组分和显色剂的浓度，改变溶液(通常用缓冲溶液控制)的酸度(pH)，分别测定在不同酸度下溶液的吸光度A，绘制A～pH曲线，从中找出最适宜的pH范围。 3.显色时间与温度 试验确定 4.溶剂 一般尽量采用水相测定 （三）透光率测量误差 （一）定性鉴别 1．对比吸收光谱的特征值 2．对比吸光度或吸光系数的比值： 例： 3．对比吸收光谱的一致性 同一测定条件下， 与标准对照物谱图或标准谱图 进行对照比较 二、定量分析 （一）单组分的定量方法 2．标准曲线法 芦丁含量测定 3．对照法：外标一点法 注：当样品溶液与标准品溶液的 稀释倍数相同时 例： 维生素B12的含量测定 精密吸取B12注射液2.50mL，加水稀释至10.00mL；另配制对照液，精密称定对照品25.00mg，加水稀释至1000mL。在361nm处，用1cm吸收池，分别测定吸光度为0.508和0.518，求B12注射液的浓度。 解： （二）多组分的定量方法 三种情况： 1．两组分吸收光谱不重叠（互不干扰） 两组分在各自λmax下不重叠→分别按单组分定量 2．两组分吸收光谱部分重叠 λ1→测A1→b组分不干扰→可按单组分定量测Ca λ2→测A2→a组分干扰→不能按单组分定量测Cb 3．等吸收双波长法 步骤： 消除a的影响测b