第四章 培养基及培养基灭菌设备2013.ppt

第四章 培养基准备及培养基灭菌设备 一、培养基概述 （一）定义及分类 1.定义 2.分类 （1）按成分不同划分： ①天然培养基：实验室、工业上 ②合成培养基：实验室 ③半合成培养基：工业上 （2）根据物理状态划分 ①固体培养基：微生物分离鉴定、计数、保存 ②半固体培养基：观察微生物运动特征、鉴定菌株 ③液体培养基：实验室、工业大规模生产 （二）培养基准备及要求 1.微生物培养基： ①孢子培养基： ②种子培养基： ③发酵培养基： 组成除有菌体生长所必需的元素和化合物外，还要有产物所需的特定元素、前体和促进剂等 灭菌：121℃，20 min 左右 2.动物细胞培养基： 要求较高，一般合成培养基、无血清培养基 灭菌：微孔滤膜过滤灭菌 3.植物细胞培养基： 组分：无机盐类，碳源，维生素，植物生长激素，有机氮源，有机酸等 灭菌：115-120℃，保持15-20min 微孔滤膜过滤灭菌 二、培养基灭菌 1、培养基灭菌的定义 用物理或化学方法从培养基中杀灭有生活能力的细菌营养体及其孢子，或从中将其除去。 灭菌与消毒的区别： 2、培养基灭菌的目的 3、培养基灭菌的要求 （1）达到要求的无菌程度（10-3） （2）尽量减少营养成分的破坏 4、灭菌的方法 ①化学灭菌： ②射线灭菌： ③过滤灭菌： 微孔滤膜过滤除菌；大多用于热敏性物料 ④干热灭菌法： 常用于空玻璃器皿、金属器具的灭菌。 ⑤湿热灭菌： 121℃，保持20~30min 5、湿热灭菌原理 （1）原理： 蒸汽在冷凝时释放出大量潜能，并且具有强大穿透力，在高温和水存在时，微生物细胞中的蛋白质极易发生不可逆凝固性变性，致使微生物在短时间内死亡。 湿热灭菌的效果，取决与致死温度和致死时间。 (2)培养基灭菌温度的选择 考虑的因素：a.高于微生物的热致死温度 b.营养成分的破坏 三、培养基工业灭菌及设备 （一）分批灭菌 1、概念： 将培养基置于发酵罐中用蒸汽加热，达到预定灭菌温度后，维持一定时间，再冷却到发酵温度，这叫做分批灭菌，又称实罐灭菌(实消)。 实罐灭菌即发酵罐与培养基一起灭菌。 2、优缺点 优点：设备投资较少；染菌的危险性较小；人工操作 较方便 缺点：发酵罐利用率低；无法采用高温短时灭菌法， 中小型发酵罐使用居多。 3、分批灭菌的操作过程（书P5） ①加培养基，密封发酵罐，慢速搅拌； ②夹套通蒸汽，培养基预热至75-90℃,停止搅拌； ③进三路蒸汽，同时微开对应排水阀，排冷凝水； ④调进汽阀，排汽阀保持罐压，在一定温度下（121℃），保温20-30min ⑤灭菌完毕后，先关一路排汽阀，再关一路进汽阀，至三路排汽、进汽阀全关闭； ⑥通无菌空气； ⑦夹套通冷凝水，冷却培养基 全过程： 升温、保温、冷却 三路进汽：蒸汽从空气管道、取样管和出料管进入罐内直接加热，直到所规定的温度，并维持一定的时间。这就是所谓的“三路进汽”。 注：凡是与培养基接触的管道都要进汽；凡是不与培养基接触的管道都要排汽 （二）连续灭菌 1、概念： 培养基在发酵罐外经过一套灭菌设备连续的加热灭菌，冷却后送入已灭菌的发酵罐内的工艺过程称为连续灭菌（连消）。 空罐灭菌也称空消。无论是种子罐、发酵罐、还是消泡罐，当培养基（或物料）尚未进罐前对罐进行预先灭菌，称为空罐灭菌。 2、优缺点： 优点：可采用高温快速灭菌工艺；发酵罐非生产占用时间缩短，容积利用率提高；热能利用率合理，适于自动化控制 缺点：不适合高粘度的培养基的灭菌；染菌可能性增高 3、连续灭菌流程及设备 ★连消塔—喷淋冷却流程： ★喷射加热—真空冷却流程： ★板式换热器灭菌流程 （1）加热器 ★连消塔： 内外两根管子套合而成； 2-3 m 高； 停留时间一般20-30s； 线速度要求0.1m/s 小孔倾斜向下45°； 小孔上稀下密； ☆关键： 小孔的加工及分布 ★连消器： 高度0.5 m 左右； 弧形挡板； ☆优点： 性能稳定；无噪声；无震动 ★喷射加热器： 蒸汽和料液迅速接触充分混合，加热是在瞬时完成；结构简单，操作时无噪声 （2）保温设备 ★维持罐： 罐身长圆筒型，上下封头球形；保温层 料液自下向上 高径比：2-4（返混） ★管式维持器： U形管与水平直管焊接或