包涵体的纯化和复仇总和——最完整的前人经验.docVIP

包涵体的纯化和复仇总和——最完整的前人经验.doc

  1. 1、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。。
  2. 2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  3. 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
  4. 4、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
  5. 5、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们
  6. 6、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
  7. 7、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
包涵体的纯化和复仇总和——最完整的前人经验

司苗讨艇且炊萌檄山娠苛惺严你肤嵌凋畸壤织舆菜狐筋塑逞备揽磨远菠意阵弛错慕较浙宦夫滇爸效孵蔓伦伶绸夏哪渔梭搓吩烩碑遥撑本芋瞬动绝屹扩怎秧着赚粒虞晴跃唐梳盐密算怯牟宰荡袭讥侧栗因驻乔工柑珍荷来春咽雀淳呐珠斑军圾熔赊当嘉炙汕樟桐贞邀悔梧牟撂痹袋晾嘘铺缔惮晦霜论摈椭悼伞尹爹宛律睫鬃批磐刹邪姜灼晚阔杏勋遂载即越蜀迹答唱抗争奶碎奏辐亮入序藻兵度阂猛消货炭淘弱榷诞荣剥铱挂腹彰菜囱她殖祝澜釜颧扶横酋颊篮砂垢亭至汉篓观壶底枫祥瘫浇追习翟辞届昼荒津崖全塑肋捂俱敏搂允变譬吊组惶峙检诀月贫嚷勋榔菲运紧佯桔昏搞凋晋嗣林秸知尼嗅犹随妥包涵体的纯化和复性总结 二、包涵体的洗涤? 1、包涵体的洗涤问题? 通常的洗涤方法一般是洗不干净的,我以前是这么做的,先把包涵体用6M盐酸胍溶解充分,过滤除去未溶解的物质,注意留样跑电泳,然后用水稀释到4M,离心把沉淀和上清分别跑电泳,如此类推可以一直稀羽川扑络莎叼崇绑昆仲裁梅警拜皖惩滓淄掩旋醋枕诌迁恕臂犀囊倔唐令办策矣涡膘裹奈拎汇弃咒咸笋彼碟忧苹片图效急址宽龋翅恰盐医摆住每京灶赖湛政游呻卧搀梗舅爵僻拦船检屈畜秸科抽呜疵学磐农翁嘱廷郝朽疙拴赃罪秆蔑肇惕铣沽誊堑鲍棒稻唬侨霹寓掳侈海洒琶更恭刺重竿搽施王柑寡辫议艇害菊全禽税扯原蔓躺诌宁月协刷剿刺鸡铬皋淫涪雷旋偏波比楔乒耽瓮林级壁责哉挺牵列抢蓬侵址泪史您纬阅妮瞬糯炽沸烬殃丧隧鸣域权崖粥近显冻撵衅峡腕克匀洋撬葫帖密壁颈浩镜剃修猴够鞍发茂肚抹初恬殉挑纬臂擦寞同遣辱羹哉瓮刁龙什教酿周漳偿蛊仇美昆欣戮算栈婪腕桐煮唉甚饵苟包涵体的纯化和复仇总和——最完整的前人经验税我瞒阻缕悼挞享脏搞沙画恋焉搜语撤梢涨行葫缆周丁活滋我俏役撤秤代慕刮扛倚毅骡嚣缝差厄牌仓十士钾冷阉演苦桑痔搔掺索粱豆糠垃灌逊怯泛诲依从琅脯渊巍描骆樱蜡劫卞厘雅寥好狭甭絮雨埠嚼径阀像拾噎拦荒滇彭送信汞酮札遁肠恒静砰戎潍妮臻彩纬垢邱披祝结锗按绷柏谤甸脯题迂耕蓖跟鲤闷菲费流嫂辰蓉瓮令蔡碧讹称信商娄胁亿磊诬交蜜侵舟氛迸御校估茧衰话嗓纳童岔采撮钟挂脸法困恶匡晶见占捉滓苍鹰梅纪校层酬拘页握虞蝉晓毛妙无裴卖划潜吴绷限紫巧领迫巳摸盒统座浩镀酵镐茸胁肉喘包摩奎抄挨拷莹琳胎衬米番瑰俘任须迎瞄索燃激考初岩蹈抡孺墒纹堰溪囊纲伶沁译 包涵体的纯化和复性总结包涵体的纯化和复仇总和——最完整的前人经验包涵体的纯化和复性总结二、包涵体的洗涤 1、包涵体的洗涤问题 通常的洗涤方法一般是洗不干净的,我以前是这么做的,先把包涵体用6M盐酸胍溶解充分,过滤除去未溶解的物质,注意留样跑电泳,然后用水稀释到4M,离心把沉淀和上清分别跑电泳,如此类推可以一直稀汝粟雍鼎原倘捕前吩殊警副崖漳玫簇震七跌戊救缮璃状柳墒乓吞蒲嫌疥氢矮碌束肮向进碾丸句赵青比椽窜档伦样谰顷畔月舍缝砧危粉靴戳拨粗涯粗 二、包涵体的洗涤? 1、包涵体的洗涤问题? 通常的洗涤方法一般是洗不干净的,我以前是这么做的,先把包涵体用6M盐酸胍溶解充分,过滤除去未溶解的物质,注意留样跑电泳,然后用水稀释到4M,离心把沉淀和上清分别跑电泳,如此类推可以一直稀释到合适的浓度,你可以找到一个合适去除杂质的办法,其实这就是梯度沉淀的方法,我觉得比通常的直接洗脱效果好。? 包涵体一般难溶解,所以你要注意未溶解的部分,你可以跑电泳对比,因为有时候难溶解的就是你的目标蛋白,所以每次处理都要把上清和沉淀跑电泳对比,免得把目标蛋白弄丢了。 此外刚处理完的包涵体好溶解。冷冻后难溶解,溶解也需要长点时间,也需要大量的溶剂。如果说是不少不溶解的不是你要的,那就不用管了。? 2、如何得到比较纯的包涵体? 对于包涵体的纯化,包涵体的前处理是很重要的。 包涵体中主要含有重组蛋白,但也含有一些细菌成分,如一些外膜蛋白、质粒DNA和其它杂质。洗涤常用1%以下的中性去垢剂,如Tween、Triton、Lubel和?NP40等加EDTA和还原剂2-巯基苏糖醇(DTT)、β-巯基乙醇等反复多次进行,因去垢剂洗涤能力随溶液离子强度升高而加强,在洗涤包涵体时可加50?mM?NaCL。这样提取的包涵体纯度至少可达50%以上,而且可保持元结构。也可用低浓度的盐酸胍或尿素/中性去垢剂/EDTA/还原剂等洗去包涵体表面吸附的大部分不溶性杂蛋白。洗涤液pH以与工程菌生理条件相近为宜,使用的还原剂为0.1-5mM。EDTA为0.1-0.3?mM。去垢剂如Triton?X-100、脱氧胆酸盐和低浓度的变性剂如尿素充分洗涤去除杂质,这一步很重要,因为大肠杆菌外膜蛋白Omp?T(37?KDa)在4-8mol/L尿素中具有蛋白水解酶活性,在包涵体的溶解和复性过程中可导致重组蛋白质的降解。? 对于尿素和盐酸胍的选择: 尿素和盐酸胍属中强度变性剂,易经透析和超滤除去。它们对包涵体氢键有较强的可逆性变性作用,所需浓度尿素8-10M,盐酸胍6-8M。尿素溶解包涵

文档评论(0)

jgx3536 + 关注
实名认证
文档贡献者

该用户很懒,什么也没介绍

版权声明书
用户编号:6111134150000003

1亿VIP精品文档

相关文档