秸秆降解菌固态发酵酶活性的研究论文.pdf

一 30o一 江苏农业科学 2013年第41卷第2期 何桂霞，张 力，张君胜，等．秸秆降解菌固态发酵酶活性的研究[J]．江苏农业科学，2013，41(2)：300—302 秸秆降解菌固态发酵酶活性的研究 何桂霞 ，张 力 ，张君胜 ，杨晓志 ，韦丽敏 (1．甘肃农业大学，甘肃兰州 730070；2．江苏畜牧兽医职业技术学院，江苏泰州 225300) 摘要：通过对纤维素降解菌的酶活进行综合测定及对其秸秆降解率的测定，对实验室现有的7个绿色木霉菌株 进行筛选 ，得到2株具有高效纤维素降解能力的菌株，分别为化 L4C、BS。化 L4C的FPA、C。、C CB酶活分别为 714．9417、647．7473、2440．601、1171．007U／mL，BS的FPA、C】、Cx、CB酶活分别为608．9127、299．0877、2214．773、 1069．109U／mL。在最优培养基配比稻草 ：麸皮 =7：3，氮源为硫酸铵、尿素，碳源为碳酸钙，自然pH值，28。条件下 培养，Bs对秸秆中半纤维素、纤维素、木质素的降解率分别达 19．74％、37．55％、22．58％；化 L4C对秸秆中半纤维素、 纤维素、木质素的降解率分别达23．90％、33．85％、19．16％。 关键词：秸秆降解菌；固态发酵；纤维素降解；筛选 中图分类号：S154．34 文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2013)O2一o3oo—O3 秸秆的主要成分是纤维素、木质素、半纤维素等，为了开 酸一乙酸钠缓冲溶液溶解，定容至 100mL 。(2)0．1mol／L 发利用秸秆、避免秸秆焚烧等问题，寻求高效降解秸秆的菌种 乙酸一乙酸钠缓冲液(pH值4．8)：称取乙酸钠6．7g和冰乙 已经成为当下研究的热点。本试验主要通过测定已经筛选出 酸2．6mL，用蒸馏水溶解并定容至 1000mL，用酸度计校正 的纤维素高效降解菌株的酶活性，评价秸秆高效降解菌株降 pH值至4．8 。(3)3，5一二硝基水杨酸显色剂 (DNS显色 解纤维素的特性，以期为筛选秸秆高效降解菌并为秸秆高效 剂)：称取3，5一二硝基水杨酸3．15g，加500II】Ll去离子水搅 复合降解菌的组合提供理论依据，从而为后期秸秆饲料生产 拌溶解，水浴至45℃，然后逐步加入氢氧化钠溶液 100mL 工艺的优化奠定基础。 (200g／L)，同时不断搅拌，直至完全溶解 ，再逐步加入酒石酸 钾钠91．0g、苯酚2．50g、无水亚硫酸钠2．50g，搅拌至溶解， 1 材料与方法 冷却到室温后定容至 10130mL，过滤 ，取滤液贮存于棕色瓶 1．1 试验材料 中，避光保存，室温下存放 7d后可以使用，有效期为 6 1．1．1 保藏菌种 绿色木霉菌的各菌株：化 L4C、L、X一57、 个月 。 CC、ME、BS、力生7均由江苏畜牧兽医职业技术学院微生物 1．2 试验方法 实验室保存。 1．2．1 菌株的活化与保存 将保存的菌种接种到PDA斜面 1．1．2 培养基及试剂 (1)PDA斜面培养基 (1L)：马铃薯 培养基上，在28℃条件下培养7d后再转接，一般转接活化 200g，葡萄糖20g，琼脂 15g，蒸馏水 1L，自然pH值 ，用于菌 2—3次，再于4℃保存备用 。 种保藏及活化 】。(2)种子培养基(1L)：葡萄糖 15g，蛋白胨 1．2．2 三角瓶种子扩增培养 用无菌水洗下经活化的孢子， lOg，酵母膏 10g，硫酸铵2．5g，磷酸二氢钾6g，氯化钙 1g， 将菌种接入三角瓶液体培养基中，置于30oC、190r／min条件 MgSO ·7H：O0．8g，碳酸钙0．4g，加水溶解并定容至 1L，调 下振荡培养24h。 节pH值至4．8，分装入250mL三角瓶中，装液量50mL／瓶， 1．2．3 固体发酵 将培养好的