采用复合保护剂提高重组普鲁兰酶稳定性.pdfVIP

1—1802／ts．201505009 DOI：10．13995／j．cnki．1 采用复合保护剂提高重组普鲁兰酶稳定性+ 赵伟超，聂尧，穆晓清，张荣珍，徐岩 (江南大学生物工程学院，教育部工业生物技术重点实验室，江苏无锡，214122) 摘 要 通过向重组普鲁兰酶(PUL)酶液中添加保护剂和防腐剂以提高其热稳定性及储存稳定性，在不同温度 下研究了复合保护剂对酶液的热稳定性影响，并研究了保护剂和防腐剂在常温保藏下对酶液贮存稳定性的影 响。结果表明，明胶、甘油、Tween20和Ca“四种保护剂能显著提高PUL的热稳定性，并通过正交试验得到了效 2 果最佳的复合保护剂配方，即Tween20 mL／L，明胶6g／L，甘油5％，Ca“0．1moL／L。在60℃下，添加复合保护 剂的PUL酶液保温1h后的酶活保留率为96．07％，较对照高出85．29％；在55℃，通过添加复合保护剂，半衰期 较对照提高了3．27倍。最终在常温保藏90d后，含有复合保护剂和防腐剂(1s／L山梨酸钾和1g／L苯甲酸钠) 的PUL酶活保留率高达85．25％，达到了工业保藏的需求。 关键词 普鲁兰酶；保护剂；热稳定性 普鲁兰酶(EC3．2．1．41)是一类催化未修饰底 糖等，显著地提高了其储存稳定性¨“；张巧等在液体 物(如支链淀粉、普鲁兰及相关聚合物)的(It一1，6一葡萄 D一塔格糖3-差向异构酶中添加0．3％尼泊金甲酯，以 糖苷键水解的脱支酶。普鲁兰酶在工业中的主要功能 及2mmol／L 是提高淀粉糖化过程的水解效率，这是由于在糖化过 条件下，酶的半衰期得到了显著提高¨2I。 程中，当普鲁兰酶与葡萄糖淀粉酶共同使用时，普鲁兰 在工业化生产中，由于淀粉糖化过程需要在较高 酶可特异性水解支链淀粉的分支点，而葡萄糖淀粉酶 的温度(55～65℃)、微酸性(pH4．5—5．5)条件下 只需水解线性的ft．-1，4一葡萄糖苷键，因此使用普鲁兰进行。1“，这就需要普鲁兰酶要在此条件下有良好的 酶可加速糖化过程并减少葡萄糖淀粉酶的用量¨“]。 稳定性。目前国际上普鲁兰酶的工业化生产主要被 在工业化酶制剂中，酶的热稳定性是关键的一个 丹麦的诺维信公司所垄断，杰能科公司也有商品化的 因素。酶的热稳定性高不仅可以延长酶的储存时间， 普鲁兰酶。而在我国，普鲁兰酶仅局限于实验室研 而且可以使酶在较高反应温度下延长酶的反应时间， 究，通过添加剂提高普鲁兰酶稳定性的研究比较有 提高生产效率，从而有效地降低生产成本。当前，提 限。本研究室，通过前期的工作，已经实现了重组普 高酶稳定性主要的方法有：蛋白质工程、化学修饰、酶 鲁兰酶(PUL)的高效表达¨4|。为了进一步实现工业 的固定化和添加保护剂等”。8。。在液体酶中直接加 化生产，本研究分析各种保护剂如糖类、多元醇类、蛋 入稳定剂是一种常用的经济有效的方法。如郝秋娟 白类、金属离子以及表面活性剂等化学物质对PUL 等人在B一葡聚糖酶溶液中添加大分子亲水型多糖黄 热稳定性的影响，并通过保护剂与防腐剂的复配以显 原胶、动物蛋白明胶、甘油、NaCl可明显提高B．葡聚