采用流式细胞仪鉴定紫花苜蓿花药愈伤组织的变异.pdfVIP

156—161 草 业学 报 第20卷第3期 PRATACULTURAESINICA 2011年6月 ACTA V01．20，No．3 采用流式细胞仪鉴定紫花苜蓿 花药愈伤组织的变异 耿小丽1，魏臻武孙，姚喜红1 (1．甘肃农业大学草业学院，甘肃兰州730070；2．扬州大学动物科学与技术学院，江苏扬州225009) 摘要：本试验采用流式细胞仪，对3个基因型8个继代周期的苜蓿愈伤组织DNA含量进行测定。通过DPAC软件 of 10．0 (data cytometre)分析出细胞DNA含量变异百分率和处于S期细胞的百分率，并采用SPSS poolapplication 软件分析出愈伤组织继代时间与DNA含量变异率之间的关系。结果表明，本试验所采用的3个基因型8个继代 周期24个紫花苜蓿愈伤组织样本DNA含量均发生了变化，且全都出现了DNA加倍的现象。在24个样本中， 10．0软件分析，表明紫花苜蓿愈伤组织DNA含量变异细胞百分率与继代时间存在相关性，随着继代时间的延长， 染色体变异率有增加的趋势，但这种趋势不是无限增大的。继代0～12周是愈伤组织DNA含量变异的集中发生 期，以后随着继代次数的增加，DNA含量变异率趋向于稳定。 关键词：苜蓿；花药愈伤组织；流式细胞仪；DNA含量变异；遗传变异 中图分类号：S541+．7；Q944．49文献标识码：A 文章编号：1004—5759(2011)03-0156—06 紫花苜蓿(Medicago =4x=32)，少数为四倍体的变异体。苜蓿花药培养时，由于小孢子在形成愈伤组织的过程中，经历了连续不断 的有丝分裂过程，因此，染色体水平上发生变异的可能性大大增加。这种遗传变异具有双重性，一方面可以利用 有益变异为育种工作服务，另一方面变异的不确定性又为优良性状的保持带来了极大的困难[1]。因此，在育种过 sativa) lengthpol- 花药培养中发现，愈伤组织继代时间越长，变异率越高。Muller等[4]利用RFLP(restrictionfragment 的多态性。不同植物染色体数目的稳定性存在差异，谷明光[53发现玉米(Zeamays)花粉愈伤组织倍性较为稳 定。 染色体计数法是植物研究中最常用的染色体检测方法[6]。此方法虽然准确性高，但操作复杂，观察细胞群体 小，难以实现大量材料的倍性鉴定‘7’8]。本试验所采用的流式细胞仪可以同时对大量细胞进行染色体检测，提高 了结果准确度，并且DNA变异可在分布图上直观地表现。此外，流式细胞仪还可以快速地鉴定细胞周期。 本试验采用流式细胞仪对3个基因型8个继代周期的苜蓿花药愈伤组织DNA含量进行测定及遗传变异分 析，旨在研究苜蓿花药愈伤组织染色体的变异现象，为紫花苜蓿优良品种选育提供基础。 1材料与方法 、 1．1试验材料 验于2008年5月开始。 收稿日期：201卜02—23；改回日期：201卜03—23 基金项目：国家自然科学基金和国家863计划项目(2008AAIOZl49)资助。 作者简介：耿小丽(1979一)，女，甘肃兰州人，博士。 *通讯作者。E—mail：zhenwu_wei@yahoo．corn．cn 第20卷第3期 草业学报2011年 157 1．2苜蓿花药愈伤组织的诱导培养 在苜蓿初花期到盛花期期间，采集3个基因型紫花