U6和H1双启动子载体用于RNAi的实验研究.pdfVIP

维普资讯 中 国 生 物 工 程 杂 志 第 24卷第 11期 CHINAB10TECHN0L0GY 2004年 11月 U6和 H1双启动子载体用于RNAi的实验研究 蹇 锐 程小星一 彭 涛 邓少丽 蒋 静 (重庆市第三军医大学微生物学教研室 重庆 400038) 摘要 为建立一条简便、有效的构建哺乳动物细胞随机RNAi文库技术路线，首先通过 PCR将 19 ～ 21ntsiRNA编码序列及终止信号等元件引入 U6启动子下游，再将该扩增产物定向克隆至H1 启动子的下游。构建的双启动子载体中，U6和 H1相对排列，均以其间插入的靶序列为模板，分 别转录出其正义和反义链，形成功能性 siRNA。以EGFP和bcl一2为靶基因的实验表明，该方法构 建的载体可有效地干扰相应基因的表达。 关键词 RNAi 双启动子载体 EGFP bcl一2 RNA干扰(RNAi)可 以高度特异和有效地抑制