第二章原核生物基因组汇编.ppt

质粒的生物学特性 （一）质粒的大小和拷贝数 1.质粒的大小：以分子质量MD或碱基对数kb表示，1MD的双链DNA=1.65kb。 质粒的大小一般在1-200kb，最大的可达1400kb(如苜蓿根瘤菌质粒pRm141a) 2.质粒的拷贝数（copy number）：指同一质粒在每个细胞中的数量，不同的质粒在同一细胞中的拷贝数有差异。 复制子 复制起始点 + 调控元件 是确定某种质粒特性的一个重要参数 复制子决定其拷贝数 类型 代表质粒 大小（kb） 拷贝数 宿主 表型特征 致育因子 F因子 95-100 1-3 大肠杆菌, 沙门氏菌, 柠檬酸杆菌 性纤毛、接合转移 R质粒 RP4 54 1-3 假单胞菌和其它G阴性菌 性纤毛、接合转移，抗Ap、Km、Nm、Tc ? R1 80 1-3 G阴性菌 抗Ap、Km、Su、Cm、Sm ? R6 98 1-3 大肠杆菌, 奇异变形杆菌 抗Km、Nm、Su、Cm、Sm ? R100 90 1-3 大肠杆菌, 志贺杆菌, 沙门氏菌 Cm, Sm, Su, Tc, Hg ? pSH6 21 ? 金黄色葡萄球菌 Gm, Tm, Km ? pAD2 25 ? 粪肠球菌 Em, Sm, Km Col质粒 ColE1 9 10-30 大肠杆菌 产大肠杆菌素E1 ? ColE2 ? 10-15 志贺杆菌 产大肠杆菌素E2 ? ColDF13 ? ? 阴沟杆菌 产大肠杆菌素DF13 毒性质粒 Ent（P307） 83 ? 大肠杆菌 产肠毒素 ? K88质粒 ? ? 大肠杆菌 粘附抗原 ? ColV-K30 2 ? 大肠杆菌 摄铁载体, 免疫机制抗性 ? pZA10 56 ? 金黄色葡萄球菌 肠毒素B ? Ti 200 ? 根癌农杆菌 诱导肿瘤 代谢质粒 CAM 230 ? 假单胞菌 樟脑降解 ? SAL 56 ? 假单胞菌 水杨酰降解 ? TOL 75 ? 恶臭假单胞菌 甲苯降解 ? pJP4 ? ? 假单胞菌 2,4-二氯苯乙酰降解 ? pSym ? ? 根瘤菌 共生固氮 质粒大小和类型 (二)质粒转移性 概念：指质粒能从供体细胞把它的一个复本转移到受体细胞 质粒在细菌间的转移，需要供体和受体细胞间的直接接触才能进行，即接合作用 可以在同种属也可以不同种属间转移 （三）质粒的复制 复制所需的酶类和复制蛋白 DNA聚合酶的利用 复制的方向性 复制的终止 复制起始 复制型 复制起点（ori）是一段特定的DNA序列，长约几百碱基对，在其相关的调控元件中含有由质粒或宿主染色体编码的、参与DNA合成起始调控因子的结合位点。 在大多数质粒中，与复制有关的蛋白质基因位于它们的作用位点——ori序列附近，因此ori位点周围的小范围DNA是质粒复制所必需的。 如果质粒DNA的大部分区域被去掉，而只保留质粒的ori序列，而且质粒是环状的，则质粒仍然能进行复制。分子克隆中利用质粒载体的结构基础。 质粒的复制型 θ型复制（主） 单向复制 双向复制 滚环复制 （四）质粒的标记 选择标记： 用于鉴别目标 DNA(载体)的存在，将成功转化了载体的宿主挑选出来。 抗生素抗性基因是目前使用最广泛 用于将特殊表型的重组子挑选出来 α-互补、插入失活 筛选标记： （五）质粒的不相容性 两个质粒在同一宿主细胞中不能共存的现象称为质粒的不相容性 第一个测序，流感嗜血杆菌，1995年 现190多种 * * * 操纵子是原核基因表达调控的一种重要的组织形式 大肠杆菌的基因多数以操纵子的形式组成基因表达调控的单元。 基因的功能并不是固定不变的，而是可以根据环境的变化进行调节，使基因的概念又向前迈出了一大步 * * * 调控蛋白都是变构蛋白（allosteric protein） 多数是单拷贝基因，只有编码rRNA和tRNA的基因有多个拷贝，有利于核糖体的快速组装和蛋白质的急需合成。 原核生物结构基因的编码顺序一般不重叠。 * 通过不同的转移方式发生基因重组，改变生物体的遗传性状，使更适应环境变化。也是基因变异、物种演化及生物进化的基础。 * * 质粒拷贝数是确定某种质粒特性的一个重要参数，从中也可获得其复制本质的基本信息。一般而言，质粒的拷贝数与其分子质量成反比关系，分子质量大的拷贝数低，分子质量小的拷贝数高。 复制子是一个遗传单位