第二章固定化酶与固定化细胞汇编.ppt

第二章 固定化酶与固定化细胞 概述 酶应用中的一些问题： 酶的稳定性较差 除少数耐高温和耐酸的酶之外，大多数的酶在高温、强酸、强碱和重金属离子等外界因素影响下，都容易变性失活 酶的一次性使用 酶在反应系统中与底物和产物混在一起，反应结束后即使酶仍有很高的活力，也难于回收利用，使生产成本提高，并且难于连续化生产 产物的分离纯化较困难 酶反应后成为杂质与产物混在一起，给产物的进一步分离纯化带来一定的困难 固定化酶是酶工程研究中的一个重要领域 一、 什么是固定化酶 固定化酶被确定下来是在1971年第一届国际 酶工程会议上提出并确定的。固定化酶是设计一种 方法，使酶被束缚在特殊的载体上，使它与整体的 流动相分隔开，但能进行底物与效应物等的分子交 换。固定化酶的统一英文名称为Immobilized Enzyme。 可以看成一般化学反应的固体催化剂一样对 待，既具有酶的催化特性又具有一般化学催化剂的催 化特性 所谓固定化酶是指在一定空间内呈闭锁状态存在的酶，能连续化地进行反应，反应后的酶可以回收，能反复使用，可实现自动化生产工艺的水不溶性酶，称固定化酶，有时也叫水不溶酶。 固定化酶现在的发展是不一定全是固定酶，研究可以用细胞或细胞器、菌体进行固定，统称为固定化催化剂。 二、固定化酶的优点 溶性酶的缺点： 1.酶是蛋白质，稳定性差，热、酸碱、有机溶剂对其有影响； 2.不能回收，无法自动化、连续化生产； 固定化酶优点： 1.极易将固定化酶与产物、底物分开； 2.可以在较长时间内进行反复分批反应或装柱连续反应； 3.在大多数情况下能提高酶的稳定性，如提高抗有机溶剂的能力； 4.酶反应过程能严格控制，能回收，自动化，连续化； 5.产物溶液中没有酶的残留，简化了提纯工艺； 6.更适合于多酶反应； 7.可以增加产物的收率，提高产物的质量； 8.酶的使用效率提高，成本降低； 固定化酶的缺点 固定化时，酶活力有损失 增加了生产成本，工厂初始投资大 与完整的菌体相比不适宜多酶反应，特别是需要辅助因子的反应 胞内酶必须经过酶的分离手续 固定化酶的原则 维持酶的催化活性及专一性 固定化的载体必须有一定的机械强度，不能因机械搅拌而破碎或脱落，有利于生产自动化、连续化 固定化酶应有最小的空间位阻，尽可能不妨碍与底物的接近，以提高产量 酶与载体必须结合牢固，从而使固定化酶能回收贮藏，反复使用 三、固定化方法： 固定化方法 非共价结合法 化学结合法 包埋法 ? 物理 离子交 吸附法 换吸附 现在又有多孔物质包络法，超过滤法等等。 实际上，用包埋法最多。 各种固定化方法的优缺点比较 吸附法 固定化方法 物理吸附法 离子吸附法 包埋法 共价键结合法 交联法 制备难易 易 易 较难 难 较难 结合程度 弱 中等 强 强 强 活力回收 高,酶易流失 高 高 低 中等 再生 可能 可能 不能 不能 不能 费用 低 低 低 高 中等 底物专一性 不变 不变 不变 可变 可变 (一)非共价结合法 结晶法 使酶结晶从而实现固定化的方法. 局限性:在重复循环中酶会损耗 分散法 通过酶分散于水不溶相从而实现固定化的方法 局限性:活力低 物理吸附法 酶被物理吸附于不溶性载体的固定化方法 局限性:与载体作用力弱,酶易脱落 离子结合法 酶通过离子键结合于具有离子交换基的水不溶性载体的方法 局限性:载体和酶的结合力弱,易受缓冲溶液种类或pH的影响.离子强度高时酶易脱落 物理吸附法 常用的吸附剂：活性碳、氧化铝、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、硅胶、羟基磷灰石等；