第4章液液传质分离过程.pptVIP

4.3 反胶团萃取 应用背景： 常规的液液萃取技术不适用于大部分基因工程的主要产品 -蛋白质的分离，原因在于: 1、蛋白质在发酵液和培养介质中绝大多数呈现离子 态，不溶于非极性的有机溶剂。 2、若蛋白质与有机溶剂接触，会引起蛋白质的变性。 为了使蛋白质能从水相萃取进入另一液相，发挥液液萃取技 术的优良分离性能和作用，需要找到一种与水不互溶，溶解 于有机溶剂，并且蛋白质溶于其中并保持活性的液相 ——反胶团。 反胶团萃取有效解了溶剂萃取过程中蛋白质不溶于有机溶剂 和易变性、失活的问题，因此得到了广泛的应用。 反胶团：表面活性剂是由亲水的极性头和疏水的非极性尾两部分组成的两性分子。表面活性剂在非极性有机相中超过一定浓度时,自发形成的纳米尺度的一种聚焦体。在这种聚焦体中，表面活性剂的憎水非极性尾向外，而极性头则向内排列形成一个极性核心，而此极性核心具有溶解水和大分（蛋白质）的能力。 4.3.1 反胶团的特性 反胶团示意图 4.3.2 反胶团萃取机理 萃取过程中，生物大分子进入反胶团相需经历三步传质过程： ① 通过表面液膜扩散，从水相到达相界面； ② 在相界面处溶质进入反胶团； ③ 含溶质的反胶团扩散进入有机相。 反萃操作中溶质亦经历相似的过程，只是方向相反，在界面处溶质从反胶团释放出来。 4.3.2 反胶团萃取机理 萃取过程传质通量计算式 反萃过程传质通量计算式 反胶团萃取蛋白质的主要影响因素 4.3.3 反胶团萃取的应用 （1）? 分离蛋白质混合物； （2）? 浓缩α-淀粉酶； （3）从发酵液中提取胞外酶 ； （4） 直接提取胞内酶； （5） 用于蛋白质复性; 案例 通过调节水相pH值和KCl浓度来实现三种蛋白质的分离。在pH=9时，核糖核酸酶的溶解度很小，保留在水相而与其他两种蛋白质分离；相分离后得到的反胶团相（含细胞色素C和溶菌酶）与0.5 mol/dm3的KCl水溶液接触后，细胞色素C被反萃取到水相，而溶菌酶留在反胶团相；含溶菌酶的反胶团与2.0 mol/dm3KCl，pH值为11.5的水相接触后，将溶菌酶反萃至水相中。 双水相萃取（aqueous two-phase extraction）就是利用物质在互不相溶的两水相间分配系数的差异来实现分离的一种新型分离技术，由于它具有收率高、成本低、可连续化操作等技术优势，因而已被广泛应用于生物化学、细胞生物学和生物化工等领域，进行生物转化，蛋白质、核酸等产品的分离纯化。用此方法提纯的酶已达数十种，其分离也达到了相当规模。近年来又进行了双水相萃取氨基酸类和病毒小分子物质的研究，大大扩展了应用范畴并提高了选择性，使双水相萃取技术具有更大的潜力和美好的发展前景。 双水相萃取 4.4 双水相萃取 4.4.1 双水相体系 物质类型 物质P的名称 物质Q的名称 两种非离子型聚合物 聚丙二醇 聚乙二醇 聚乙烯醇 葡萄糖（Dex） 羟丙基葡萄糖 聚乙二醇（PEG） 聚乙烯醇 葡萄糖 (Dex) 聚乙烯吡咯烷酮 P为带电荷聚电解质 硫酸葡聚糖钠盐 羧甲基葡聚糖钠盐 聚丙二醇、聚乙二醇 甲基纤维素 P Q都为聚电解质 羧甲基葡聚糖钠盐 羧甲基纤维素钠盐 P为聚合物 Q为盐类 聚乙二醇 磷酸钾、硫酸铵、硫酸钠 硫酸镁、酒石酸钾钠 4.4.1 双水相体系 图中把均相区与两相区分开的曲线，称为双节点曲线。如果体系总组成位于双节点曲线下方的区域，两高聚物均匀溶于水中而不分相。如果体系总组成位于双节点曲线上方的区域，体系就会形成两相。上相富集了高聚物Q，下相富集了高聚物P。用A点代表体系总组成，B点和C点分别代表互相平衡的上相和下相组成，称为节点。A、B、C三点在一条直线上，称为系线。 4.4.2 双水相中溶质分配理论 溶质在双水相中的分配性质可用分配系数K表示，计算方法如下： 溶质在双水相中的分配受表面自由能、表面电荷、疏水作用及生物亲和作用等因素的影响，其中表面自由能、表面电荷对分配行为的影响最为重要，因而对这两方面的理论研究也比较深入。溶质分配的理论研究对双水相萃取起到指导作用，使萃取过程可通过控制相关的影响因素而得到优化。 4.4.2 双水相中溶质分配理论 (1) 表面自由能的影响 因为大分子物质的Mr很大，λ的微小改变会引起分配系数K发生很大的改变，因此利用不同的表面性质，可以达到分离大分子的目的。 溶质在双水相中分配的影响因素 4.4.2 双水相中溶质分配理论 （2）表面电荷的影响 （3）疏水作用 两相系统中如有盐存在，会对大分子在两相间的分配系数发生改变 在pH值为等电点的双水相中，蛋白质主要根据表面疏水性的差异产生各自的分配平衡。 4.4.3 双水相萃取的应