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诸葛斌，方慧英,王正祥-食品与生物技术学报
第27卷第4期 食品与生物技术学报 V01．27No。4
2008年7月 JournalofFoodScienceand Jul．2008
Biotechnology
文章编号：1673-1689(2008)04-0091—06
优化简并引物PCR克隆Candida
3一磷酸甘油脱氢酶基因片段
陈献忠， 饶志明， 沈微， 诸葛斌， 方慧英， 王正祥， 诸葛健。
(江南大学工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡214122)
摘 要：为了从工业生产茵株耐高渗产甘油假丝酵母(CandidagzyfP一押ogP，zPs)克隆甘油合成的
限速酶编码基因胞浆NAD+一3一磷酸甘油脱氢酶基因(ctGPD)，对不同酵母和其他真核生物的
NADt3一磷酸甘油脱氢酶进行比对，分析氨基酸和核苷酸的保守序列，设计了4对简并引物用于
利用其中一对中等简并度的引物扩增出CgGPD基因中约600bp的保守核心片段。DNA序列及
推绎的氨基酸序列进行比对分析表明，该基因片段与其他酵母的胞浆NAD+_3一磷酸甘油脱氢酶基
因的对应区域具有典型的保守区域，并且与安格斯毕赤酵母的GPI)基因相似性较高。
关键词：PCR；NAD+依赖3一磷酸甘油脱氢酶；产甘油假丝酵母；克隆；简并引物
中图分类号：Q785 文献标识码：A
of
CloningNAD+一DependentGlycerol3-PhosphateDehydrogenase
Gene fromCandida with
Fragment glycerinogenes
Primers
Oligonucleoide
Degenerate
CHEN RAO SHENWei，ZHUGEBin，
Xian—Zhong，Zhi—Ming，
H WANG ZHUGEJan’
FANG J
ui-Ying， Zheng—Xiang，
LabofIndustrial of 214122，China)
(Key Education，JiangnanUniversity，Wuxi
Biotechnology．Ministry
Abstract：In is incytosolbyreductionofthe
Saccharomycescerevisiae，glycerolsynthesized
intermediate AP)to
glycolytic dihydroxyacetonephosphate(DHglycerol
followed ofG3PtO studieshadrevealedthat
bydephosphorylationglycer01．Further cytol
the for
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