中国药典2005版三部附录.doc

中国药典三部附录（2005年版） 135种 页码数： 2005版药典附录第44页 附录VI G A群脑膜炎球菌多糖 第一法测磷法(仲裁法) 本法用于测定细菌荚膜多糖在色谱柱中的分配系数(KD)和多糖在规定KD值 以前的回收率。 试剂 (1)流动相取氯化钠11．7g、叠氮钠0．1g，加水使溶解成1000ml，混匀， 用O．1mol／L氢氧化钠溶液调节pH至7．O。 (2)蓝色葡聚糖2000溶液 取蓝色葡聚糖2000 20mg，加流动相使溶解成10ml。 (3)维生素B12溶液称取10mg维生素B12，加流动相使溶解成10ml。 色谱柱的制备取琼脂糖4B凝胶或琼脂糖CL-4B凝胶约200ml，加流动相400ml充分 搅拌，放置约1小时使其沉淀，倾去上层含悬浮颗粒的悬液。如此反复3～5次 后，加流动相200ml，混匀，抽去凝胶中的空气，装于1．5cm×90cm色谱柱中，约 87cm高，．用流动相洗脱，流速为每小时15～20ml，以2～3倍柱床体积的流动相 洗脱(约500m1)，使柱床平衡。 色谱柱的标定取蓝色葡聚糖2000溶液lml加于已平衡的色谱柱中，以流动相洗 脱，流速每小时15～20ml，用组分收集器收集洗脱液，每管收集3～5ml，照紫外 -可见分光光度法(附录ⅡA)，在波长260nm处测定各管洗脱液的吸光度，以吸光 度为纵坐标，洗脱液体积(m1)为横坐标分别作图，260nm波长处的峰顶洗脱液体 积为空流体积V0。 取维生素B12溶液lml，自“加于已平衡的色谱柱中起，同法操作，370nm波长处 的峰顶洗脱液体积为柱床体积Vi。 测定法取供试品约lml(含多糖抗原3～5mg，如为冻干制品可用流动相溶解)，加 于已标定的色谱柱中，用流动相洗脱，用组分收集器收集洗脱液，每管收集5ml， 照磷含量测定法(附录ⅦA)测定每管洗脱液的磷含量。以供试品每管洗脱液的磷 含量为纵坐标，洗脱液体积(m1)为横坐标作图，主峰峰顶洗脱液体积为Ve。 按下式计算 KD=ve-v0/Vi-V0。 式中KD为供试品分配系数； Ve为供试品洗脱液体积，ml； V0为空流体积，ml； Vi为柱床体积，ml。 计算供试品在KD值0．5的多糖回收率 Rx(％)=Ax/At×100％ 式中Rx为KD值O．5供试品的多糖回收率； Ax为供试品在KD值O．5各管洗脱液的磷含量 之和； At为供试品所有管洗脱液的磷含量之和。 第二法仪器法 试剂与色谱柱的制备同第一法。 色谱柱的标定取蓝色葡聚糖2000溶液lml与维生素B12溶液0．2ml，混匀后加于 已平衡的色谱柱中，以流动相洗脱，流速每小时15～20ml，检测波长206nm，用 组分收集器收集洗脱液，记录色谱图，色谱图中，第一峰为蓝色葡聚糖2000峰， 峰顶的洗脱液体积为空流体积V0；第二峰为维生素B12的峰，峰顶的洗脱液体积 为柱床体积Vi。 测定法取供试品约lml(含多糖抗原3～5mg，如为冻干制品可用流动相溶解)， 加于已标定的色谱柱中，用流动相洗脱，流速为每小时15～20 ml，检测波长 206nm，用组分收集器收集洗脱液，记录色谱图，即得。 按下式计算 KD=Ve-V0/Vi-V0 式中KD为供试品分配系数； V为供试品洗脱液体积，ml, K为空流体积，m1； Ⅵ为柱床体积，ml。 计算供试品在KD值O．5多糖回收率 Rx(％)=Ax/At*100％ 式中凡为KD值O．5供试品的多糖回收率(％)； Ax为供试品在KD值O．5的色谱图面积； A0为供试品色谱图总面积。 【附注】 过柱操作在10～20℃进行。 书页号：2005版药典三部附录71页 附录Ⅺ K IgG含量测定法 (紫外-可见分光光度法) 本法系依据免疫球蛋白G(IgG)与相应的抗体特异性结合后，在适宜的电解 质、温度、pH条件下，产生凝集反应，形成抗原抗体复合物，根据供试品的吸 光度求出供试品中IgG的