铁纳米线壳聚糖抗体生物探针的制备和层析检测.pdfVIP

分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究简报 第2 期 第37 卷 2ω年2 月 Chinese Joumal of Analytical Chemislry 275 -278 铁纳米线/壳聚糖/抗体生物探针的制备和层析检测 杨吴杨笑鹤陈裕泉潘敏. (浙江大学生物传感括国家专业实验室.杭州 31∞27) 摘 要 以戊二1m为交联剂制备 Fe 纳米线j壳聚糖复合物，研究其对牛血清臼蛋白的吸附性能:缓冲液 pH 为6.0 时，达到最大平衡吸附量，为 148.40 mglg;以 Fe 纳米线/壳~糖交联吸附or-HCG 抗体制备生物探针， 组装层析试纸条，遂行免疫层析实袋，结果表明:其检测灵敏度为 10 lU/L.与市场上销售的胶体金早孕试纸 条栩比，可以将旱孕检测时间提前2 -3 d。 关键词 纳米线，免疫层析俭测，兔疫传感:15.生物探针 1 引言 免疫层析技术出现于20 世纪80 年代初期，是建立在免疫渗滤基础上的-种免疫学检测技术。 目 前，基于胶体金标记的免疫层析技术，由于其直观、快速、操作简便、价格低廉等优点，已经广泛应用于早 孕的初步诊断及肿瘤疾病的辅助检测中。但由于其检测灵敏度偏低，只能用作定性检测，尤其是当检测 结果接近灵敏度的极限值时，必须使用灾.它传统检测方法进行确诊。因此探索新的标记物，以提高检测 灵敏度，实现定量检测，具有重要的意义。 本实验利用多孔阳极氧化销筷极电化学沉积和j备 Fe 纳米线，以壳聚糖包被 Fe 纳米线，以戊二应为 交联剂对壳聚糖表面进行酸基化，研究 Fe 纳米线/壳聚糖对牛血清白蛋白的吸附性能，然后将其与 α-HCG 抗体偶联，制备 Fe 纳米线/壳聚糖/α-HCG 抗体生物探针，进行免疫层析实验。本实验利用了 Fe 纳米线的纳米特性，实现了 HCG 的定性检测，并为后续的通过磁性检测装置实现 HCG 的定量检测， 打下了坚实的基础I B11 0 2 实验部分 2.1 试剂与仪器 织销，纯度99. 999%.厚度为0. 5 mm(北京蒙泰有限技术开发中心) ;壳聚糖(脱乙酸度 90%) 、 牛血清向蛋白(BSA，国药集团化学试剂有限公司) ;鼠忧人β-HCG 单抗(6. 4 glL) 、鼠抗人 α-HCG 单抗 (9.6 glL) 、羊抗鼠 IgG 多抗(7.3 glL) 、 HCG 抗原(10 、25 IU/L) (上海品睿生物科技有限公司) ;其官试 剂均为分析纯。 实验用水为去离子水。 紫外分光光度计CARY 100( 美国瓦里安公司) ;磁座(杭州宏昌电声磁技术开发有限公司) ;点样仪 XYZ3仪汾(美罔 Biodol 公司) ;PHS-3C 酸度计(上海雷磁公司) ;MPMS XL-5 超导锺子干涉仪(美同 Quanlum Design 公司) ;SIRJON- lOO 场发射扫描电镜(美国 FEJ 公司) ;JEM-J2∞EX 透射电镜(日本 JEOL 公司)。 2.2 实验方法 2.2_1 Fe 纳米线的制备 将钥销裁剪成合适尺寸，经电化学抛光、清洗后置于0.3 moνL1在民主洛液中， 冰浴，电压40V 阳似氧化I h;然后把氧化后的模板在磷酸和销酸混合溶液中浸泡 I h ，再重复前面相同 的氧化步骤;最后进行阶梯降Æ处理.即可获得所帘的 AAO 模板。 电解液组成为:FeSO. -7H 0.IOO glL;(N凡)lS叭，15 glL;MgSO. ,30 glL;抗坏血酸.1 glL:丙主饵， 2 2mνL。将电解液的 pH 值调至3 ，采用 50 Hz 交流电对AAO 模饭进行电化学沉积，沉狈电压 15 V ，沉 积时间 5 min。 用饱和氯化锡去除模板销基体后，将模板溶于氮氧化纳溶液中，用去离子水反复清洗、磁座沉降至 2∞8.05.07收稿;2烟8份按受 本文系闹革Z十一1i科技支撑项目(No.2α)6日A030日03) 资助 • E-mail: 惧。mjn@z;u. 时U. C,n