植物细胞大规模培养及有用物质生产概要1.pptVIP

　⑤、培养条件的影响 光照、温度等影响次生代谢。在胡萝卜愈伤组织培养中，光照条件使紫红色愈伤组织能够生成大量的花箐苷，并且低温条件下，生成量高。 　⑥、采用固相细胞培养系统 细胞生长分裂旺盛时，次生代谢物产量低。采用固相培养，将细胞培养在惰性基质中，细胞生长缓慢，可提高次生代谢物质的产量。 思考题 1．一个好的悬浮细胞系有哪些特征？ 用于建立悬浮细胞系的愈伤组织有何 要求？ 2．建立悬浮细胞系的关键技术有哪些？ 3．悬浮细胞系在继代培养中其群体生长 规律？ 4．细胞大规模培养有哪些培养系统？ 紫杉醇：二萜类化合物 最早由太平洋红豆杉Taxus brevifolia的树皮中分离 广泛用于治疗卵巢癌、乳腺癌、非小细胞肺癌等十几种癌症 目前主要来源于红豆杉属植物 紫杉醇简介 理化性质 英文名：Paclitaxel, Taxol? or TM 分子式：C47H51NO4 水溶性：0.7mg／ml 稳定性： pH4～8 稳定； pH 4较稳定； pH 8 易分解； 在特定条件下紫杉醇可被氧化，但极难还原； 紫杉醇研发过程 NCI开始大规模植物药研发筛选 1958 FDA批准上市 1992 临床III期 1991 临床II期 1985 临床Ⅰ试验 1983 发表作用机制 1979 完成结构鉴定 1971 从红豆杉中分离出紫杉醇 1968 发现紫杉醇抗癌活性 1967 进 展 年 代 NCI称其为过去15年中开发的最好的抗癌药物 20世纪90年代抗肿瘤药的三大成就之一 汤姆森科技桂冠奖 Ramesh Panchagnula, International Journal of Pharmaceutics.1998(172)1-15. 市场需求 抗癌一线用药 　销售额年增长率5亿美元 理论需求量 2g /人, 500万人/年 1000kg/年 实际销量 　　350 kg/年 紫杉醇供需相差十分悬殊 图1：国际紫杉醇原料药需求走势图（单位：公斤） 图2：国际紫杉醇销售额（亿美元） 紫杉醇开发的关键问题 上游产业——药源问题 下游制剂产业 药效（活性、水溶性） 安全性 生物相容性 药源问题 红豆杉 主要原料植物 国家一级保护野生植物，全球十大濒危物种 之一 生长缓慢 分布有限 Taxol含量低 树皮中Taxol含量:0.00001-0.069% 3000棵树=10吨树皮=1kg Taxol=500病人 人工栽培 采用种子繁殖、扦插等无性繁殖方法快速、大面积人工繁育红豆杉幼苗 寻找红豆衫的替代物 从红豆杉非树皮部位提取 产紫杉醇的非红豆杉植物 优点：生长周期缩短 简便、直接 缺点：1、紫杉醇含量低 生长缓慢 2、提取工艺复杂 药源问题解决办法（一） 药源问题解决办法（二） 化学合成 全合成 1994年获得成功 现有六种途径 半合成 以10-DABⅢ和Baccatin Ⅲ作为半合成原料获得紫杉醇 新方法用10-DAT 缺点：1、合成过程烦琐复杂，几十步 2、费用高，化学试剂昂贵 3、总收率太低（2%） 优点：1、原料枝叶含量丰富、 提取相 对容易，充分利用再生资源 2、产率高 3、最具实用价值可以工业化生产 4、获取紫杉醇构效关系信息，进行结构改造 缺点：合成过程相对复杂 （11步化学转化和7步分离） 药源问题解决办法（三） 生物方法 组织和细胞培养 微生物发酵 生物合成 研究阶段 红豆杉生物合成途径基本明确 10种相关酶基因被克隆表达 利用基因工程手段改造红豆杉提高紫杉醇产量 优点：1、摆脱自然因素，可长期稳定 生长 2、适应市场、方便调节 3、成分简单，有利于分离纯化 4、成本低、生长周期短 5、为半合成提供原料 6、有望工业化生产 缺点：1、产量低、不稳定 2、工业化放大研究 紫杉醇水溶性很差 0.77mM/L 使用增溶剂： 聚氧乙烯蓖麻油和无水乙醇 存在问题 稳定性和水溶性较差（7mm/L）