我国山丘、平原疫区利什曼原虫.pdfVIP

维普资讯 ，口／ 一 一 101 我国山丘、平原疫区利什曼原虫 分离株 kDNA分析 ) 吕劳丽 胡孝素 敬保迁0 罗 萍 林芳清 ‘／ ‘ 1．华西医科大学寄生虫学研究室 成都 6l0o41 2．川北医学院微生物学教研室 南充 637000 3．四川省卫生管理干部学院寄生虫学教研室 成都 6l0041 提要 为鉴别我国山丘、平原疫区杜氏利什曼原虫分离株，采用内切酶A／uI对其kI A『 进行酶切。结果显示实验各株均有 500bp片段；L．d．泣川人株、L．d．四川人株、L．d．甘肃 人株 (G )、L．d．四川犬株、L．infantum 及L．d．Jedd出具有210bp片段 ；L．d．四川人株、 L．d．甘肃人株 (G )及 L．d．四川犬株具有 120bp片段；L．．泣川人株、L．d．甘肃人株 (GS2)和 L．d．四川犬株 具有 400bp和 280bp片 段。L．d．甘肃 犬株 也 具有 400bp片 段 ； L zr丑n／lore和L．d．Jeddal1具有280bp片段。提示山丘疫区不同分离株的kDNAAtuI簿切片段 相近，其中人株与犬株的相似；山丘疫区分离椿与平原疫区分离株的酶切片段之间有较大差异， 山丘疫区分离株与 L．infantum 的酶切片段之同既有相似又有差异。 关键词 利什曼原虫1kDNA,I山丘疫区I平原疫区 ——————_1一 I— — l～ 利什曼原虫属动基体 目锥虫科原虫，其 109前 鞭 毛 体溶 于 lml裂 解 缓 冲 液 动基体 DNA (kinetoplastDNA，简称 kD． (100reotol几 Nac1，10reotol几 Tris：HC1， NA)是锥虫科特有的线粒体DNA，它 由大 pH8．0，10reotol几 EDTA。100ug／m]pro． 环和微环两部分构成。其中微环结构 占总 teinaseK，1％sareosine)中，60℃孵育 1h， DNA的95％．长约 lkb，具有进化率快的 42℃孵育过夜，当虫体完全消化后，4℃离 特征，它的碱基序列有不同属、种、亚种甚 心 15000r／min×60mln。将沉淀溶于TE中， 至株的差异_1_2J，这种差异可作为分类、鉴 进行饱和酚／氯仿抽提、乙醇沉淀。待乙醇 定利什曼原虫较敏感的工具 _4J。同时由于 完全挥发后落于 rE中，加^ RNaseA (终 基因结构 的相 对稳 定性，kDNA 不会因 浓度为501~g／m1)。37℃孵育3h。饱和酚／氯 RNA、蛋白质等结构出现改变而变化，因 仿抽提、乙醇沉淀，溶于 rE中。TE透析， 此是分类的理论基础。本文采用内切酶酶切 紫外分光光度计测定DNA含量。 对我国山丘和平原疫 区利什曼原虫 kDNA 1．3 kDNA的酶切 取各株利什曼原虫前 进行分析．为阐明我国杜氏利什曼原虫的地 鞭毛体kDNA各 0．5,ug，加^限制性内切酶 域株提供理论依据。 A／uI 10u，于 37℃水浴中消化 20h。将消 1 材料和方法 1．1 利什曼原虫虫株来源 见附表。 *本曝腰得到国家 自然科学基垒 (