DOC-2作用蛋白的筛选及与TGFβⅢ受体相互作用的初步验证.pdfVIP

《中国癌症杂志》2007年第17卷第12期 CHINA oNCOLOGY 2007 Vo1．17 No．12 DOC一2作用蛋白的筛选及与TGF[3 HI 受体相互作用的初步验证 【摘要] 背景与目的：人卵巢癌差异表达基因DOC一2既是肿瘤抑制基因也是信号分子，参与细胞的生长分化 过程。筛选DOC一2氨基端磷酸酪氨酸作用结构域PID(nDOC-2)的相互作用蛋白并进行初步验证，为研究DOC-2 的信号通路提供线索。方法：将含有人DOC一2氨基端PID结构域cDNA的片断插入酵母表达载体pGBKT7中构建 诱饵质粒，转化酵母菌AH109并在其内表达，然后转化人胎脑cDNA文库，在营养缺陷培养基和X- -半乳糖苷酶 (X— —ga1)上进行阳性克隆的双重筛选，PCR扩增目的片段，测序，并进行生物学分析，寻找DOC一2氨基端PID结构 域的相互作用蛋白。将 DOC一2 cDNA和TGFI311I受体cDNA共转染人卵巢癌细胞系HO一8910，利用免疫沉淀和 Western Blot，对TGF[311I型受体是否能与DOC一2相互作用进行初步分析。结果：经扩增和筛选胎脑cDNA文库及序 列分析，21个侯选阳性克隆中3个克隆为：APLP1、TGF[311I型受体的部分mRNA和PCDHGC3(protocadherin gamma subfamily C3)。免疫沉淀及Western blot结果显示，DOC一2与TGF[3 11I型受体相互作用后可形成蛋白复合物。结论： 获得的3个基因编码的蛋白可能参与了DOC一2的信号转导，DOC-2与TGF[311I型受体可能存在互相作用，并通过 TGF[3 11I型受体在TGF[3的信号通路中起作用。 【关键词] 人DOC一2基因；PID结构域； TGF[3信号通路 中图分类号：R737．31 文献标识码：A 文章编号：1007—3639(2007)12-0909-05 Screening of DOC-2 interactive proteins and identification of the interaction between DOC-2 and TGFI~m receptor L|U Shu juan，HAN Jun—tao，WANG Tao。REN Rui(Department of Obstetrics and Gynecology，Xijing Hospital，the 砒 Military Medical University，Xi’an Shaanxi 710032，China) CorresponderlATe to：LIU Shu-juan E—mail：hanliu@fmmu．edu．cn 【Abstract】Background and purpose：DOC一2 serves as one of the tumor suppressing genes in human ovarian cancer and plays a role in the process of cell growth and differentiation．This study was to investigate the role of DOC一2 in the TGF[3 signal pathway and verification of the interaction between DOC一2 and TGF[3 11I receptor．Methods：The bait vector was constructed by inserting the PID domain of DOC一2(nDOC一2)into yeast express vector pGBKT7．pGBKT7一nDOC2 was transformed into the yeast AH109 and confirmed to be expressed．After the human foetus brain cDNA library had been transformed．the positive clones was screened by both nutritio