- 1、本文档共35页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
常见细胞培养问题与回答
常見細胞培養問題與回答
新竹食品工業發展研究所
洪啟仁副研究員
Influence of culture conditions on cell division numbers by
the cumulative physiologic stress
Reactive oxygen species (ROS)
The Biology of Cancer (© Garland Science 2007)
Influence of culture conditions on cell division numbers by
the cumulative physiologic stress
p16INK4A can act to halt further proliferation.
The Biology of Cancer (© Garland Science 2007)
Cultured cells would grow happier when
decrease cumulative physiologic stress !
細胞保存方式
收到後放-80℃冰箱,但隔日須活化培養:
放-80℃overnight ,隔日活化培養。若不活化培養應
隨即放液氮保存。
過一段時間才要活化培養:
直接移至液氮保存
細胞保存常見問題
Q: 放-80℃冰箱保存時間過長對細胞有何影響?
A: -80℃冰箱由於溫度變動大而易對細胞造成傷害,
更因此隨著貯存時間愈久而細胞存活率愈低。
Q: 冷凍細胞會隨著液氮保存時間愈久,而降低存
活率嗎?
A:細胞株置於液氮保存不會影響存活率。
活化培養的程序
打開水浴槽,確認溫度
將冷凍管以水浴快速解凍(1~2分鐘) ,且
必須完全解凍避免細胞內冰晶反覆形成( )
立刻將解凍後的細胞液加至flask(dish)
中,然後緩慢加入新鮮培養基 避免滲透(
壓差傷害 )
置於培養箱培養,隔日再離心更換新鮮
培養基(避免剛解凍後的細胞受到離心之
物理傷害)
活化培養常見問題
1. 冷凍管解凍不完全。
2. 未避免滲透壓差傷害。
3. 解凍完馬上離心。解凍完後的細胞生長勢弱,離心(
使得細胞傷害更大,造成生長勢無法回復。)
96.7.1~97.7.31期間該類反應占總反應之35%
活化培養常見問題
冷凍管解凍及培養基回溫的溫度須配合細胞適合生長的溫度,
否則細胞容易生長不佳。曾發生以下案例 :
1. SF9昆蟲細胞適合生長於低溫 (28 ℃)環境,然而客戶解凍
該細胞時卻以 37℃水溫解凍,結果日後生長狀況不佳。
2. 客戶將細胞冷凍管置於 56℃水浴下解凍。
3. 冷藏於4℃下之培養基未加以回溫即進行培養。
培養基相關問題
Q:細胞培養資料單上建議於培養基中額外添加的Supplement
是否可以乎略?
例如培養基中已含有L-Glutamine(L-Gln) ,是否還要添
加?
1. L-Gln濃度是否到達建議量。
2. 培養基中的L-Gln容易分解,因此放置過久的培養基
必須再補充至足量的L-Gln 。
3. 細胞是否容易受到L-Gln不足而受影響。Raw264.7細胞
容易因 L-Gln 不足而分化。
培養基相關問題
RPMI 1640 medium with 2 mM L-glutamine adjusted to contain
1.5 g/L sodium bicarbonate, 4.5 g/L glucose, 10 mM HEPES and
文档评论(0)