常见细胞培养问题与回答.pdf

常見細胞培養問題與回答 新竹食品工業發展研究所 洪啟仁副研究員 Influence of culture conditions on cell division numbers by the cumulative physiologic stress Reactive oxygen species (ROS) The Biology of Cancer (© Garland Science 2007) Influence of culture conditions on cell division numbers by the cumulative physiologic stress p16INK4A can act to halt further proliferation. The Biology of Cancer (© Garland Science 2007) Cultured cells would grow happier when decrease cumulative physiologic stress ! 細胞保存方式 收到後放-80℃冰箱，但隔日須活化培養: 放-80℃overnight ，隔日活化培養。若不活化培養應 隨即放液氮保存。 過一段時間才要活化培養: 直接移至液氮保存 細胞保存常見問題 Q: 放-80℃冰箱保存時間過長對細胞有何影響? A: -80℃冰箱由於溫度變動大而易對細胞造成傷害， 更因此隨著貯存時間愈久而細胞存活率愈低。 Q: 冷凍細胞會隨著液氮保存時間愈久，而降低存 活率嗎? A:細胞株置於液氮保存不會影響存活率。 活化培養的程序 打開水浴槽，確認溫度 將冷凍管以水浴快速解凍(1~2分鐘) ，且 必須完全解凍避免細胞內冰晶反覆形成( ) 立刻將解凍後的細胞液加至flask(dish) 中，然後緩慢加入新鮮培養基 避免滲透( 壓差傷害 ) 置於培養箱培養，隔日再離心更換新鮮 培養基(避免剛解凍後的細胞受到離心之 物理傷害) 活化培養常見問題 1. 冷凍管解凍不完全。 2. 未避免滲透壓差傷害。 3. 解凍完馬上離心。解凍完後的細胞生長勢弱，離心( 使得細胞傷害更大，造成生長勢無法回復。) 96.7.1~97.7.31期間該類反應占總反應之35% 活化培養常見問題 冷凍管解凍及培養基回溫的溫度須配合細胞適合生長的溫度， 否則細胞容易生長不佳。曾發生以下案例 : 1. SF9昆蟲細胞適合生長於低溫 (28 ℃)環境，然而客戶解凍 該細胞時卻以 37℃水溫解凍，結果日後生長狀況不佳。 2. 客戶將細胞冷凍管置於 56℃水浴下解凍。 3. 冷藏於4℃下之培養基未加以回溫即進行培養。 培養基相關問題 Q:細胞培養資料單上建議於培養基中額外添加的Supplement 是否可以乎略？ 例如培養基中已含有L-Glutamine(L-Gln) ，是否還要添 加？ 1. L-Gln濃度是否到達建議量。 2. 培養基中的L-Gln容易分解，因此放置過久的培養基 必須再補充至足量的L-Gln 。 3. 細胞是否容易受到L-Gln不足而受影響。Raw264.7細胞 容易因 L-Gln 不足而分化。 培養基相關問題 RPMI 1640 medium with 2 mM L-glutamine adjusted to contain 1.5 g/L sodium bicarbonate, 4.5 g/L glucose, 10 mM HEPES and