毛豹皮樟醇提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用-厦门大学学报（自然.doc

老鹰茶乙醇提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用 芶 琳1 钟昱阳2 阳 艺2 王西瑶2* （1. 四川农业大学生命科学学院，2.四川农业大学农学院，四川 成都 611130） 摘 要：探讨老鹰茶醇提取物对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用。以老鹰茶为材料,经乙醇浸提得醇提取物，并通过高效液相色谱法对提取物主要成分进行分析，进而测定该提取物对α-葡萄糖苷酶活性的影响。结果表明，老鹰茶醇提取物主要活性成分为黄酮类物质，该提取物对α-葡萄糖苷酶活性有较强的抑制作用，半抑制率（IC50）为0.12 mg/mL。进一步的酶动力学研究表明其抑制机理为可逆混合型抑制,对游离酶的抑制常数(KI)为0.058 mg/mL，而对酶-底物络合物的抑制常数(KIS)为0.178 mg/mL。由此可知，老鹰茶醇提物对α-葡萄糖苷酶具有抑制作用，能有效的抑制α-葡萄糖苷酶的活性。其结果揭示老鹰茶有望成为抑制α-葡萄糖苷酶活性的保健或医疗产品原料，具有值得深入研究和开发应用的潜在价值。 α-葡萄糖苷酶；抑制作用；乙醇提取物 中图分类号：Q356.1 文献标志码：A α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase)对糖的分解代谢具有重要作用，是一类能从低聚糖的非还原末端催化α-1, 4糖苷键水解, 释放出葡萄糖的一类酶，主要有麦芽糖酶、蔗糖酶、异构麦芽糖酶、乳糖酶等酶类[1]。已有的研究结果显示，糖尿病、肥胖症和高血脂等很多代谢性疾病都与α-葡萄糖苷酶有关[2]。对于糖尿病患者而言，抑制α-葡萄糖苷酶的活性可有效的降低餐后血糖的水平，有利于控制糖尿病的发展及防治并发症的发生。因此，寻找有效的α-葡萄糖苷酶抑制剂便成为了糖尿病治疗药物研发的一个重要途径。植物中存在着多种生物活性成分，大都具有重要的生物学功能。李春英[3]等在研究中发现辣椒叶的乙醇提取物对α-葡萄糖苷酶具有抑制作用。作者在α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选的研究中发现老鹰茶醇提物对α-葡萄糖苷酶的活性具有抑制作用，但相关的酶学研究鲜见报道。老鹰茶通常是指由植物毛豹皮樟（Litsea coreana var. lanuginosa）的叶加工制成的茶品，毛豹皮樟为樟科木姜子属植物[4]，我国西南四川、贵州和云南等地分布较广，民间常将毛豹皮樟的叶经干燥处理后，作为茶饮，具有生津止渴、清热解毒的功效。有研究表明老鹰茶中含有多糖[5]、多酚[6]和黄酮[7]等多种生物活性成分。Jia [8]等人还报道了从老鹰茶中分离得到的多糖具有抗氧化作用。作者试图从酶学角度了解老鹰茶对α-葡萄糖苷酶活力的影响，探讨其对酶作用的机理，以期为老鹰茶作为相关天然药物的开发利用奠定基础。 1.1 材料 老鹰茶来自于四川省雅安市老鹰茶开发繁殖场，由当年生长的毛豹皮樟嫩叶制成。 主要试剂：α-葡萄糖苷酶(G0660-750UN)、4-硝基酚-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG, N1377-1G)购自美国Sigma-Aldrich公司，四氢呋喃（色谱级）购自MERK，甲醇（色谱级）购自FISHER,芦丁对照品购自中国生物制品检定研究院，磷酸氢二钠和磷酸二氢钠等试剂为国产分析纯。 主要仪器：高速万能粉碎机（FW80型）北京市永光明医疗仪器厂，三孔电热恒温水槽（DK-8D型）上海齐欣科学仪器有限公司，电子分析天平（BS210S型）Sartorins公司，紫外可见分光光度计（UV-1240型）SHIMADZU公司，高效液相色谱仪（Agilent1260型）安捷伦科技有限公司。 老鹰茶原材料经60 ℃烘干，粉碎，过筛备用。称取1.0 g老鹰茶干粉，置于100 mL三角瓶中，加入60%的乙醇30 mL，60 ℃恒温浸提2 h，8000 r/min，离心10 min，收集上清液。余下的残渣另加30 mL 60%的乙醇，经60 ℃浸提1 h，8000 r/min，离心10 min，取上清。合并2次上清液并定容至100 mL，即得老鹰茶醇提取液，浓度为10 mg/mL（以每毫升提取液所含的老鹰茶克数表示）。 供试品溶液：取老鹰茶醇提取液1 mL，置10 mL量瓶中，用流动相B稀释至刻度，摇匀，即得。 芦丁对照品溶液：取10.05 mg芦丁对照品置于10 mL容量瓶中，加2.0 mL甲醇溶解，再用流动相B稀释至刻度，从中精密量取1.0 mL，置50 mL量瓶中，用流动相B稀释至刻度，摇匀，即得。 参照文献[9]对老鹰茶醇提取液进行检测分析，以芦丁作为标示物质。色谱条件：色谱柱Lichrospher C8，250 mm×4.0 mm×5 μm；柱温30 ℃；检测波长280 nm；流速1.0 mL/min；进样量20 μL。流动相（A：四氢呋喃/15.6 g/L的磷酸二氢钠溶液（PH 3.0）=5/95（V/V），B：四氢呋喃/15.6 g/L的磷酸二氢钠溶液