甲醇对酵母过氧化氢酶活性的影响机理研究3.pdf

中　国　生 　物 　工 　程 　杂 　志 第 23 卷第 12 期 CHINA BIOTECHNOLOGY 2003 年 12 月 甲醇对酵母过氧化氢酶活性的 影响机理研究 1 1 1 1 1 1 2 黄卓烈 　苏 　婷 　巫光宏 　梁欣欣 　何 　平 　詹福建 　丘泰球 ( 1 华南农业大学生命科学学院　广州 　510642 　　2 华南理工大学食品与生物工程学院　广州 　510641) 摘要 　将酵母过氧化氢酶加入一定比例的甲醇 ,测定其活性变化 。结果表明:在含 2 % 甲醇时酶 活比对照提高 4026 % 。将粗酶液用 70 %饱和度的硫酸铵盐析后离心所得的上清液再加入硫酸 铵至 80 %饱和度 ,离心的沉淀溶解在缓冲液中 ,上 Sephadex G75 柱 ,分离出的有酶活性的蛋白峰 经电泳得一条蛋白带 ,说明过氧化氢酶已经被提纯到电泳纯 。光谱分析发现 , 甲醇处理后过氧化 氢酶纯酶的吸收光谱和荧光发射光谱与未经处理的比较基本不变 ,而差示光谱出现明显的正峰 和负峰 。由动力学分析可知 ,在甲醇中 ,过氧化氢酶的 V 和 K 值均有不同程度提高 。 max m 关键词 　过氧化氢酶 　甲醇 　光谱分析 　动力学分析 ( ) 　　过氧化氢酶 catalase ,CAT , EC1. 11. 1. 16 是一 选择性 ;而后者则通过对酶蛋白分子表面的活性位 种含铁卟啉的酶 ,广泛存在于动植物和微生物细胞 点进行更理性的设计 , 以改善和优化酶的功效[ 1] 。 中。它能催化过氧化氢分解成氧和水 。机体 内超 本试验研究了不同浓度的甲醇体系条件下面 氧化物歧化酶在催化 O - 歧化反应时不断生成 包酵母 CAT 活性的变化 ,讨论 CAT 在 甲醇中的活 2 H O ,后者亦成为活性氧 ,它可透过细胞膜 ,在膜外 力变化及其可能作用机理 。 2 2 与 Fe2 + 或 Cu2 + 反应生成 OH- 自由基 , 引起脂质过 1 　材料与方法 氧化 ,直接损伤机体 。因此 ,过氧化氢酶对于减轻 活性氧损伤具有一定意义[ 1] 。 11 　材 　料 ( ) 有机相催化又可叫非水相催化 、微水相催化 , 本实验用面包酵母 S accharomy ces cerevisiae 为 是 目前在生物技术中颇具基础性和应用性的研究 材料进行研究 。 领域 。20 世纪 60 年代发现酶在有机溶剂中仍具有 12 　酶活力及蛋白浓度测定 [ 1 ,2 ] [3 ] 活力 ;80 年代 以后相继发现 ,某些酶在近乎无