CCR3在哮喘豚鼠模型肺和骨髓中的表达及意义.docVIP

　　CCR3在哮喘豚鼠模型肺和骨髓中的表达及意义 【摘要】 目的 观察哮喘豚鼠肺和骨髓组织嗜酸粒细胞趋化因子受体3（CCR3）及嗜酸粒细胞（EOS）不同时相表达的变化, 探讨哮喘发病的可能机制。方法 用卵白蛋白(OVA)和生理盐水致敏法制备豚鼠哮喘和对照模型, 分为正常对照组（N）及哮喘组（A、B、C、D、E），每组8只，于激发后30 min，6 h，12 h，24 h，48 h处死，瑞氏染色计数骨髓涂片和外周血涂片中EOS比例,免疫组织化学技术检测骨髓中CCR3的表达；制备豚鼠肺组织病理标本, 苏木精-伊红染色,免疫组化检测肺组织中CCR3的表达。结果 ①哮喘组骨髓和外周CCR3及EOS表达明显增加；②OVA激发后,骨髓和外周CCR3及EOS表达：30 min变化不明显，6 h，12 h达到峰值，24 h开始下降，48 h恢复正常水平；③骨髓的变化早于外周，CCR3的表达早于EOS的增多，且CCR3和EOS呈线性相关。结论 哮喘豚鼠肺组织和骨髓之间存在骨髓EOS细胞到循环再到肺组织的通路，CCR3表达增强, 为EOS从骨髓快速募集到肺组织提供了可能。 【关键词】 支气管哮喘 CCR3 EOS 骨髓 豚鼠 Abstract:Objective To explore the pathogeic mechanism of asthma by tracking the expressions of CCR3 and EOS in lung tissue and bone marroatic models.Methods Guinea pigs (GP) atic model (groups A, B, C, D and E). The control GP (group N) in, 6 h, 12 h, 24 h and 48 h after the challenge, peripheral blood and bone marrober and percentage of EOS. The expression of CCR3 in bone marromunohistochemistry.Results ① The total counts of EOS and the expression of CCR3 in bone marroa models than in controls. ②After the challenge ained in the normal range at 30 min, began to rise and reached the peak at 6 h and 12 h, found to be decreased at 24 h and returned to normal by 48 h. ③The bone marroent of EOS and they tarro cells to move to the circulating blood to the lung tissue. The increase of CCR3 expression ent of EOS from bone marroa; CCR3; EOS; bone marroin, OVA,美国Sigma公司)、CCR3多克隆抗体及SABC免疫组化试剂盒(武汉Boster公司) 、奥林巴斯图像采集系统、德国百瑞雾化器和自制雾化箱。 1.2 方 法 1.2.1 哮喘模型的建立 哮喘组于第1天腹腔注射抗原混悬液1ml (OVA 100 mg、氢氧化铝200 mg) , 2周后将豚鼠放于自制雾化吸入箱内, 喷射雾化吸入10 g/L OVA 20 min,连续5天［1］。对照组于第1天腹腔注射1 ml生理盐水, 2周后喷射雾化吸入生理盐水20 min,连续5天。最后1次雾化吸入后，哮喘组A、B、C、D、E分别于30 min，6 h，12 h，24 h，48 h处死动物,对照组12 h处死，取材并作相应测定。 1.2.2 骨髓和外周血EOS计数 于末次激发后,断颈处死豚鼠, 取颈动脉血制作血涂片。取两侧股骨, 去掉两端骨骺, 剖开骨干髓腔,以含肝素100 U/ml的生理盐水溶液将骨髓细胞冲洗出, 4℃,1000 r/min离心5 min后，沉渣涂于多聚赖氨酸处理的玻片上，干燥后以40 g/L多聚甲醛固定30 min,-20℃保存备用。骨髓和外周血涂片用瑞氏染色, 随机计数200个白细胞, 并计算其中EOS百分比。 1.2.3 骨髓细胞CCR3表达的检测 采用SABC免疫组织化学法检测骨髓中CCR3的表达。以兔抗大鼠CCR3 IgG为一抗, 以生物素化的羊抗兔IgG为二抗。取骨髓沉渣涂片, 按SABC免疫组