胆碱酯酶抑制法检测辛硫磷农药残留-河北师范大学学报.pdf

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胆碱酯酶抑制法检测辛硫磷农药残留-河北师范大学学报

第27 卷 第2 期 河北师范大学学报(自然科学版) Vol.27 No.2 2003 年 3 月 Journal of Hebei Normal University (Natural Science Edition) Mar.2003 胆碱酯酶抑制法检测辛硫磷农药残留 侯学文,  何衍彪,  徐汉虹 (华南农业大学资源 境学院, 广东广州 510642) 摘 要:利用胆碱酯酶水解碘化硫代丁酰胆碱后形成的硫代胆碱, 与二硫双对硝基苯甲酸发生化学反应 生成黄色产物, 在4 12 nm 比色测定.利用此法测定酶、底物的添加量以及保温温度和保温时间对酶活力的影 响, 还研究了不同浓度与保温时间的辛硫磷对胆碱酯酶活力的抑制情况.获得了胆碱酯酶优化的反应条件, 结 果还表明胆碱酯酶对辛硫磷比较敏感, 其抑制中浓度为I 50为3.904 9μg/L. 关键词:胆碱酯酶;辛硫磷;农药残留 + + 中图分类号:Q 556 .1;S 481 .8   文献标识码:A    文章编号:1000-5854(2003)02-0181-04 0  前 言 农药的使用是保障农业丰收的必要手段, 但由于我国农药结构不合理以及规范用药意识差, 使得因 食用农药残留超标蔬菜而中毒的事件屡屡发生, 这引起了人们的关注, 迫切要求有适当的技术来监控农 产品中农药残留情况.有机磷和氨基甲酸酯类农药是造成农药中毒事件的主要元凶, 它们都是通过抑制 乙酰胆碱酯酶的活力而发挥作用的, 因此可以采用体外检测胆碱酯酶的活力抑制情况来表征此类农药 [1] 的含量 .应用此检测法的关键是要获得对主要农药敏感、活力高的胆碱酯酶, 笔者通过前期工作已获 得一较好的酶源, 为了能实际应用, 必须建立起相应的检测条件, 包括对试剂用量、保温温度、保温时间 及对农药的灵敏度等情况进行研究. 1 试验材料与方法 1.1 试验材料 1.1.1 供试材料及试剂 碘化硫代丁酰胆碱(BTCI)和二硫双对硝基苯甲酸(DTNB)为Fluka 及Aldric 公司产品;胆碱酯酶 由华南农业大学昆虫毒理研究室提供;辛硫磷原药(91.1%)为广州农药厂产品;其余试剂均采用国产分 析纯. 1.1.2 主要仪器设备 分光光度计, 水浴加热器, pH 检测计等. 1.2 试验方法 1.2.1 试剂配制方法 磷酸缓冲液是用0.1 mol/L 的磷酸氢二钠和磷酸二氢钠溶液, 在pH 计监控下以适当比例混合, 分 别配制pH 为5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 9.0 的磷酸缓冲液;酶液是取60 mg 胆碱酯酶粉溶于 8mL (pH 8.0)的磷酸缓冲液而成;BTCI 溶液是称取100 mg BTCI 溶于10 mL (pH 8.0)的磷酸缓冲液; DTNB 溶液是称取60 mg DTNB 溶于10 mL(pH 8.0)的磷酸缓冲液;辛硫磷溶液是用pH 8.0 的磷酸缓 冲液分别配制浓度为2.0, 1.0, 0.5, 0.25, 0.125, 0.062 5 mg/L 的药液, 现配现用. 1.2.2 底物浓度与胆碱酯酶活力关系 [ 2] 胆碱酯酶活力分析采用Ellman 法 .在干净试管中加入pH 为 8.0 的磷酸缓冲液, 50 μL DTNB 溶 收稿日期:2002 07 03;修回日期:2002 11 22 基金项目:农业部农药检定所合作推广项目 作者简介:侯学文(1969 ), 男, 四川崇州人, 华南农业大学副教授, 主要从事农药生物技术的研究工作. 182 河北师范大学学报(自然科学版) 第27 卷 液、50 μL 酶液, 在37 ℃下水浴保温30 min, 测定前加入相应量的BTCI 溶液, 调整磷酸缓冲液与BTCI 的量, 使反应总体积为3.15 mL, 立即在412 nm 比色测定反应液的 OD 值, 记录0, 180 s 读数, 计算 ΔOD 值, 每个浓度重复3 次, 以平均

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