去甲基化作用对胃癌细胞生物学行为及xaf1基因表.docVIP

　　去甲基化作用对胃癌细胞生物学行为及xaf1基因表 【摘要】 目的：探讨去甲基化药物5脱氧杂氮胞苷(5AzaCdR)对体外培养的胃癌BGC823细胞增殖活性、细胞周期和凋亡以及对此细胞株xaf1基因表达的影响. 方法：用MTT法检测不同浓度5AzaCdR对细胞增殖活性的影响；PI染色和流式细胞仪检测不同浓度5AzaCdR处理72 h后细胞周期分布和细胞凋亡率；RTPCR法检测用药前后xaf1基因表达的变化. 结果：用1×103，5×103，10×103 nmol/L的5AzaCdR处理BGC823细胞6 d后，试验组细胞增殖抑制率较对照组明显升高（Plt;0.05），并呈剂量依赖关系；流式细胞仪分析表明，各药物浓度处理72 h后凋亡率明显增加：试验组凋亡率分别为（4.53±0.21）%，（8.11±1.01）%和（11.56±0.86）%，与对照组(0.51±0.01)%相比较差异显著(Plt;0.05). 在5AzaCdR处理前，未检测到BGC823细胞株xaf1 基因mRNA表达，经过5AzaCdR处理后，xaf1 mRNA重新表达. 结论：5AzaCdR可抑制BGC823细胞增殖；促进细胞凋亡；使xaf1基因甲基化状态得到逆转，而重新表达. 【关键词】 5氮2脱氧胞苷；xaf1基因；BGC823肿瘤细胞株；甲基化；细胞增殖；细胞凋亡 　　【Abstract】 AIM: To observe the effects of the demethylating agent, 5Aza2′deoxyctidine (5AzaCdR), on the proliferation, cell cycle, apoptosis and xaf1 mRNA expression of stomach cancer BGC823 cells. METHODS: The proliferation of BGC823 cells treated by different concentrations of 5AzaCdR ent of cell cycle and apoptosis ed by floetry (FCM); the change of xaf1 mRNA expression iquantified by RTPCR before and after 5AzaCdR treatment. RESULTS: The groanner after exposure to 5AzaCdR at different concentrations (1×103, 5×103, 10×103 nmol/L) for different time. FCM analysis shoent (5×103, 10×103 nmol/L). CONCLUSION: 5AzaCdR can inhibit the proliferation of BGC823 cells through blocking cell cycles and inducing cell apoptosis. It can also restore xaf1 gene transcription silenced by demethylation. 　　【Keyethylation；proliferation；apoptosis 　　0 引言 　　凋亡抑制蛋白因子家族(IAP)的成员在结构上具有1至3个高度保守的杆状病毒凋亡抑制因子重复序列(BIR)结构域［1］，在肿瘤的增殖异常及对抗肿瘤药物耐受形成中发挥了重要作用. X染色体相关凋亡抑制蛋白(XIAP)是IAP中抑制Caspase活性最强的成员. XIAP相关因子1(XAF1)是一个新近发现可以拮抗XIAP抗凋亡作用的蛋白，它可以逆转XIAP对细胞的保护. XAF1在多种肿瘤细胞和组织中存在低表达或表达缺失，XAF1的基因沉默与其启动子高甲基化明显相关［2］. 我们采用5AzaCdR对胃癌细胞株进行处理, 检测xaf1基因表达，并分析肿瘤细胞生物学行为变化，以期进一步探讨胃癌的发生机制及治疗的新方法. 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 胃癌BGC823细胞株（兰州大学病理解剖学教研室）；RPMI1640培养液（美国Gibco公司）；胎牛血清（兰州民海生物技术有限公司）；5AzaCdR（美国Sigma公司）；配制5AzaCdR为1 mol/L的母液，-20℃保存，使用时用RPMI1640稀释为工作浓度. Tap酶（上海生工生物工程技术有限公司）；酶联免疫检测仪(BioTek公司)；Trizol(Invitrogen公司)