高中生物同步课件6.1蛋白质提取分离选板1.pptVIP

第六章　 蛋白质和DNA技术;第1节　蛋白质的提取和分离;学习导航 1.知道蛋白质分离和提取技术的基本原理。 2.尝试蛋白质的提取和分离。 [重、难点];;二、电泳技术及分离蛋白质的原理 1.电泳现象：作为带电粒子，蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷______的电极方向移动。 2.电泳技术分离蛋白质的原理 (1)蛋白质含有游离的氨基和羧基，是______电解质，在一定pH条件下带有电荷。;(2)蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷______的电极方向移动。 (3)蛋白质所带的电荷数越多，移动得_____；电荷数相同时，分子量_____，则移动越快。 三、“血清蛋白的提取和分离”活动程序 1.点样：将新制血清5 μL、质量浓度为0.4 g/mL的________和质量分数为0.1%的______指示剂等体积混匀后，用微量加样器吸取5 μL样品，小心加到电泳样品槽的胶面上。;2.电泳 3.染色：用质量分数为0.05%的_______________染色液对凝胶进行染色。 4.脱色：用体积分数为7%的__________对凝胶板进行浸泡漂洗数次，直至底色脱净。 5.制干胶板：将已_____的凝胶板放在______中浸泡3 h～4 h后，放在两层透气的_______中间自然干燥。;判一判 (1)蛋白质和DNA都可以用电泳的方法进行分离纯化。(√) (2)在同一个电场电泳后，在凝胶中形成的一个带纹就是一种单纯蛋白质。(×) (3)在电泳时，应先将稳压稳流电泳仪调到20～30 mA，再使样品进入分离胶。(×) (4)分离操作正确的前提下，如果带纹均匀、狭窄、平整，则说明分离效果比较好。(√);四、其他蛋白质的提取与分离 1.牛奶中酪蛋白的提取与检测 (1)当pH＝___时，酪蛋白的溶解度降低，并析出沉淀。用______除去酪蛋白沉淀中的_____后，即得到纯的酪蛋白。 (2)酪蛋白中含有酪氨酸，能与______试剂起颜色反应，首先生成白色沉淀，加热后变成红色。;2.卵清蛋白质的分离 选取鸡、鸭、鹅、鹌鹑等动物的新鲜_____做实验材料。采用______法分离卵清蛋白质。;想一想 可否利用蛋白质的提取与分离技术快速诊断早期癌变？ 【提示】　可以。只需从早期患者的尿液、血液或细胞裂解液中提取少量蛋白质样品,采用蛋白质指纹图谱技术，就可以更加快速、简便、准确地对细胞癌变作出诊断。;;2.聚丙烯酰胺凝胶电泳 (1)凝胶形成：;(2)加入SDS作用：使蛋白质发生完全变性，解聚成单条肽链；与各种蛋白质形成蛋白质－SDS复合物，SDS所带负电荷的量远远超过了蛋白质分子原有电荷量，掩盖了不同蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。;3.结果分析 (1)不同蛋白质的混合溶液，在经过同一个电场电泳后，会在凝胶上形成不同的带纹，每一种带纹可能就是一种蛋白质。 (2)如果要对每一条带纹作进一步的研究，只需将带纹剪下，分别予以洗脱，然后对洗脱液中的蛋白质做进一步分离。;特别提醒　①琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理。 ②琼脂糖凝胶电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。 ③测定蛋白质相对分子质量通常用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳，原因是在一定浓度范围内聚丙烯酰胺的热稳定性强，可用检测仪直接测定。; 关于电泳的说法不正确的是(　　) A．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程 B．带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动 C．蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少 D．用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳，蛋白质的电泳迁移率完全取决于分子的大小;【解析】　蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素，SDS能与各种蛋白质形成蛋白质－SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同种蛋白质间的电荷差异，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。 【答案】　C;变式训练 在蛋白质的分离提纯技术中，最为简捷灵敏的是(　　) A．离心技术　　　　　　B．层析技术 C．电泳技术 D．盐析 解析：选C。常用的蛋白质分离提纯技术，包括离心技术、层析技术和电泳技术等，其中电泳技术最为快捷灵敏、简便易行。盐析可用来提取蛋白质，而不能分离蛋白质。;要点二　实验中应注意的一些问题 1.由于制备凝胶的丙烯酰胺和双丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并且容易被皮肤吸收，因此操作必须在通风橱内或通风处进行。 2.将电泳凝胶片放在考马斯亮蓝R250染色液中染包30 min后,多次更换脱色液至背景清晰。脱色后，可将凝胶浸于保存液中，长期封装在塑料袋内使其不会降低染色强度。为保存永久性记录，可对凝胶进行拍照，或将凝胶干燥成胶