实验五DNS方法分析蛋白质n端.ppt

DNS法分析蛋白质N-末端氨基酸;蛋白质结构分析有关方法;有关资料;最初，蛋白质序列测定主要采用手工的埃德曼降解和环甲基 化（Edman deglation - dansylation）方法（Edman，1950 年）。蛋白质序列测定的快速进展，应该归功于自动测序仪 的研制成功。与埃德曼和贝格于1967年发明的测序法相比， 1980年开始使用的自动测序仪的灵敏度提高了近1万倍。 质谱技术的发展为蛋白质序列测定开辟了新的途径。第一次 用这种方法测定完整的蛋白质分子是在1997年。质谱法测序 的突出优点是可以识别翻译后修饰而得到的特殊氨基酸。用 其它方法进行蛋白质序列测定时，这种修饰信息无法获得。 正是利用了质谱技术，人们得出了r-氨基丁酸处于凝血素N- 末端的重要结论。;DNS法分析蛋白质N-末端氨基酸的原理;1、α-氨基与丹磺酰氯的反应;2、 DNS-蛋白质的酸水解;3、乙酸乙酯抽提 ;1、DNS-氨基酸可用??酰胺薄膜层析法进行分离和鉴定，在薄膜上检测灵敏度为0．01μg(相当于10—10mol)。聚酰胺薄膜层析是1966年后发展起来的一种新层析技术。由于它具有灵敏度高，分辨力强，快速，操作方便等优点，已被广泛应用于各种化合物的分析。 2、聚酰胺是—类化学纤维原料，即锦纶(又称尼龙)，对极性物质的吸附作用是由于它能和被分离物之间形成氢键。这种氢键的强弱就决定了被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附能力的大小。层析时，展层剂与被分离物在聚酰胺膜表面竞争形成氢键。因此选择适当的展层剂使分离在聚酰胺膜表面发生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的连续过程，就能达到分离物分离的目的。 3、聚酰胺薄膜是在涤纶片基上涂上一层锦纶薄膜制成的。;实验方法;聚酰胺薄膜层析 点样 层析 ;注意事项;思 考