新城疫病毒HN基因及其构建的核酸疫苗抗肿瘤作用研.docVIP

　　新城疫病毒HN基因及其构建的核酸疫苗抗肿瘤作用研 【关键词】 病毒HN基因 核酸疫苗抗肿瘤 　　肿瘤的发生与发展是一个多因素、多阶段、多基因的复杂变化过程。传统的肿瘤手术治疗只能去除原发病灶,不能从根本上杜绝其再生与繁殖;放化疗虽能杀灭肿瘤细胞,但也使大量正常组织细胞受到严重损伤。随着核酸疫苗的发展,特别是治疗性疫苗的研制,为控制肿瘤提供了新的思路。NDV用于肿瘤治疗及在分子生物学水平上进一步研究 NDV的抑瘤机理引起了越来越多学者的关注。目前,应用NDV的HN基因构建核酸疫苗抗肿瘤治疗成为基因治疗肿瘤领域内研究的热点。本文就HN基因在NDV抗肿瘤上的作用，以及HN基因构建的核酸疫苗抗肿瘤作用机制的国内外的相关性研究情况进行综述。 1 新城疫病毒及其HN基因概况 新城疫病毒（ne，基因组为负链单股RNA，基因组约由15156个核苷酸组成，分子量（M），1986年，P.Chambers等应用分子克隆技术建立了NDV的cDNA文库，结合限制性酶切图谱分析、斑点杂交、Northern Blot分子杂交等手段，确定了几个结构蛋白在基因组上是按3′-NP-P-M-F-HN-L-5′的顺序排列[1]。HN蛋白是NDV的主要免疫分子，其基因编码一相对分子质量为7.4×104的糖蛋白,表达在病毒包膜上,具有凝集红细胞及神经氨酸酶的活性,在病毒侵染过程中识别细胞受体、介导病毒吸附细胞膜。HN蛋白是NDV抗肿瘤的功能性蛋白,所具有类似于流感病毒的神经氨酸酶活性,可以水解细胞表面唾液酸,使肿瘤细胞细胞表面抗原充分暴露,增强肿瘤细胞的免疫原性,增强免疫监视细胞的识别和杀伤[2，3]。 2 HN基因构建的核酸疫苗抗肿瘤作用研究进展 NDV的HN蛋白在抗肿瘤作用中发挥着重要作用，国外和国内学者借助分子生物学和基因工程技术 在体外克隆表达HN蛋白，充分探讨其作用机制和效果。国外的研究表明[3],HN蛋白不仅介导病毒吸附于肿瘤细胞并与融合蛋白一起帮助病毒侵入肿瘤细胞,其神经氨酸酶活性,能水解宿主细胞表面唾液酸,暴露宿主细胞生物识别位点,诱导外周血单核淋巴细胞表面表达TRAIL(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)并不依赖该病毒的复制。国内的研究将新城疫病毒血凝素神经氨酸酶（HN）基因以核酸疫苗的形式进行多方面研究，魏林等［4,5］采用RT-PCR 从NDV中克隆HN cDNA,并构建HN的真核表达载体pcDNA3-HN，通过转染COS-7细胞,其质粒能良好地表达,并具有与鸡红细胞发生凝集的生物学特性。并将该质粒应用于C57荷瘤小鼠,实验表明其在一定程度上能够抑制肿瘤的生长。pcDNA2-HN治疗组荷瘤小鼠脾细胞的NK及CTL活性比未治疗组有明显的升高,说明此质粒具有增强荷瘤小鼠非特异及特异性抗肿瘤细胞免疫的作用。米志强［6］以pVAX1为表达载体构建了含NDV HN基因的pVHN核酸疫苗，进行体内外的抗肿瘤研究实验。结果表明，单独HN基因在体外转染能够降低肿瘤细胞表面唾液酸含量，体内表达后引起Ｔ淋巴细胞亚群数量改变，能够抑制实体瘤的成长。含有HN基因的重组质粒对人肿瘤细胞具有杀伤作用,可诱导肿瘤细胞凋亡,薛立娟等［7］以pIRElneo为表达载体构建了NDV HN基因的pIRHN核酸疫苗，在体外转染Hela细胞，检测pIRHN在真核细胞当中的表达状况和HN基因导致细胞死亡的类型，同时测定Hela细胞唾液酸含量的变化。pIRHN能够在真核细胞中表达，能促进肿瘤细胞死亡，其死亡方式主要以诱导细胞凋亡为主，可能通过其表达产物与肿瘤细胞唾液酸受体的相互作用，发挥其抗肿瘤作用。 近年来，人们在采用一个载体携带HN基因治疗肿瘤研究基础上，越来越关注联合基因治疗的研究，以探讨更好的治疗肿瘤的方法。王秀荣等［8］采用MTT法和乳酸脱氢酶释放法，检测IL-15质粒、PCD-HN质粒对小鼠抗肿瘤免疫反应作用中Ｔ淋巴细胞的增殖和NK细胞的活性。IL-15质粒、PCD-HN质粒同时免疫小鼠，其淋巴细胞增殖指数和自然杀伤细胞活性的百分率明显高于其它实验组，说明两者对抑制肿瘤生长具有迭加效应。李宵[9]等构建了表达融合IL-18HN和VP3IL-18的真核表达质粒,将该重组质粒与单独表达IL-18HN和凋亡素基因的重组质粒分别注射荷B16肿瘤C57BL/6小鼠,通过比较抑瘤率,探讨了HN、凋亡素和IL-18基因的协同抑瘤效果。结果显示,pIRVP3IL-18HN重组质粒的抑瘤效果明显高于上述基因的单独应用,说明凋亡素基因与 IL-18和HN有协同抑瘤效应,联合基因治疗可显著提高抑瘤效果。连海[10]等构建了含 HN基因和VP3基因的真核重组子pVHN和pVVP3,应用HN基因和VP3基