早期糖尿病大鼠心肌NOS系统与胶原纤维演变的实验.docVIP

　　早期糖尿病大鼠心肌NOS系统与胶原纤维演变的实验 【摘要】 目的：观察不同时期糖尿病（diabetes mellitus,DM）大鼠血清、心肌组织中NO、NOS水平及心肌胶原纤维的变化，探讨NO与心肌胶原纤维的相关性。方法：应用链脲佐菌素（STZ）腹腔注射建立SD大鼠糖尿病模型，设立正常对照组（1个月、2个月和3个月）和模型组（1个月、2个月和3个月）。测定各组大鼠血清、心肌匀浆中的NO含量及NOS活性，利用Van Gieson 氏胶原纤维染色法观察各组大鼠心肌胶原纤维的变化。结果：DM大鼠血清、心肌中的NO、NOS水平较正常组显著降低（Plt;0.05）并随着糖尿病病程的延长不断降低，心肌胶原纤维在糖尿病组明显增生，而且也随着病程的延长不断加重。结论：DM大鼠心肌胶原纤维的增生与细胞中NO及NOS水平的减少有关。 【关键词】 心肌病变 一氧化氮（NO） 糖尿病 链脲菌素 胶原纤维 Abstract Objective: To observing the levels of NO and NOS and of blood serum and cardiac muscle in diabers mellitus ,during different periods and study the correlation betuscle. Methods: SD rats al group (one month, tonths and three months) and modal group (one month, tonths and three months) .Modal rats uscle by Van Gieson collgen fiber dye. Results: The levels of NO and NOS in DM blood serum and cardiac muscle decrease noticeably pared to normal groups (Plt;0.05). groups and continue to groe.Conclusion:The increase of collagen fibers in cardiac muscle is related to the drop of the levels of NO and NOS in cells. Key yopathy (DC)； Nitric oxide(NO)； Diabetes mellitus(DM)；Streptozotocin(STZ)；Collagen fibers (CF) 糖尿病心肌病变（diabetic cardiomyopathy, DC）是糖尿病常见的一种并发症，临床表现为心力衰竭，心律失常，心源性猝死，是糖尿病主要死亡原因之一。近年来的研究发现胶原纤维增生是引起糖尿病心肌病变的原因之一。已往对胶原纤维的研究多在缺血再灌注方面，而NO对胶原纤维的影响方面研究的较少，因此，我们就这方面进行了研究，现报导如下。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 药物与试剂：链脲佐菌素（美国SANLAN),NO、NOS试剂盒（南京建成生物工程研究所）、三氯化铁（上海星山化工厂）、苏木精（上海化学试剂公司进口分装）、苦味酸（上海化学试剂公司）、酸性品红（上海新中化学厂）。 1.1.2 动物：SD雄性大鼠42只，体重180 g～200 g由福建医科大学实验动物中心提供,合格证号：闽物质检号（2002-2006）。 1.2 方法 1.2.1 动物分组与模型：SD雄性大鼠42只适应性喂养1 g/kg，72 h后尾静脉采血测定血糖，血糖大于16.7 mmol/L者为糖尿病模型动物。成型模型组分为三组①糖尿病1个月组②糖尿病2个月组③糖尿病3个月组（按250 mg/kg，1次/d灌胃）各7只（糖尿病3个月死亡1只，糖尿病1个月死亡1只）。各组大鼠均以颗粒饲料喂养，自由进食、饮水。 1.2.2 取血和制备心肌匀浆：分别在1个月、2个月和3个月后取各组大鼠6只静脉取血置于4 ℃冰箱冷藏待测，用乌拉坦（按1 g/kg）麻醉处死，迅速取心肌组织置于4 ℃预冷生理盐水洗净血液，用滤纸吸干水份后称重，以4 ℃生理盐水制成10%匀浆，4 ℃下3 000 r/min离心15 min，取上清液置于4 ℃冰箱冷藏待测。 1.2.3 血清和心肌组织中NO、NOS的测定：NO用硝酸还原酶法测定，NOS用化学比色法测定，蛋白质用考马斯亮兰法测定。测定步骤按试剂盒说明严格操作。 1.2.4 Van Gieson 氏胶原纤维染色：用乌拉坦（按1 g/kg）麻醉处死大鼠后，迅速取各组大鼠心肌组织用4 ℃预冷生理盐水洗净血液后用