猫爪草对耐多药结核分枝杆菌感染小鼠细胞免疫的作用.docVIP

　　猫爪草对耐多药结核分枝杆菌感染小鼠细胞免疫的作用 【摘要】 目的 探讨猫爪草提取物对耐多药结核分枝杆菌（multiple drugs resistant bacillus tuberculosis, MDR-TB）感染小鼠免疫功能的调节作用。方法 采用MDR-TB菌液灌胃制备小鼠MDR-TB感染病理模型，将30只健康小鼠随机分为3组，每组12只，分为正常组、模型组和猫爪草提取物组；采用ELISA法检测小鼠血清中与结核细胞免疫密切相关的细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-12含量的变化。结果 猫爪草组与模型组比较，IFN-γ、IL-12含量明显升高，IL-4、IL-10含量明显下降（Plt;0.05或Plt;0.01）。结论 猫爪草提取物可以通过上调细胞因子增强小鼠的细胞免疫功能，为临床应用猫爪草治疗耐多药结核病提供了理论依据。 【关键词】 猫爪草 提取物 MDR-TB 细胞因子 免疫功能 【Abstract】 Objective: To investigate the regulative effect of the extract of Radix Ranunculi Ternati on cellular immunity induced by MDR-TB in rats. Methods: MDR-TB model in rats al control group, model group and Radix Ranunculi Ternati group ined by ELISA. Results: pared to the model group, Radix Ranunculi Ternati group resulted in significant in serum IFN-γ, IL-12, IL-4 and IL-10 (Plt;0.05 or Plt;0.01). Conclusion: The extract of Radix Ranunculi Ternati can enhance the cellar immunological function in rats, accordingly provide the theory base of healing of tuberculosis munological function 结核病严重危害人类健康的传染病之一，自20世纪80年代以来，因为滥用抗结核药物和艾滋病病毒（HIV）等感染而导致全球性结核病疫情回升[1]，耐多药结核分枝杆菌成为临床治疗的难点。近年来，依据猫爪草具有清热解毒之功效，临床上用于医治癌肿等，取得一定疗效，已成为国家重点发展的三类药材之一[2]。本研究从免疫学角度通过猫爪草提取物对小鼠细胞免疫功能的影响，探讨其对MDR-TB治疗效果。 1 材料与方法 1.1 材料 IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12 ELISA双抗体夹心试剂盒（深圳晶美公司产品）；；EXL808全自动酶标仪（美国BIO-TEK公司产品）；选用昆明种成年小鼠，体重（20±2）g，雌雄各半，由安徽医科大学实验动物中心提供（动物合格证号：皖医实动准第01号）。 1.2 MDR-TB感染动物模型的建立 将转种纯化后的MDR-TB菌落刮取，加无菌生理盐水磨菌制备成1mg/ml的菌液，经尾静脉注射2 ml菌量感染小鼠[3]。 1.3 中药提取物的制备 将猫爪草中药粗粉，以水为溶剂加热回流提取，过滤，20%乙醇沉淀除去杂质，浓缩，冻干得水提取物；将同批次药材粗粉，以75%乙醇加热回流提取，浓缩，冻干得醇提取物[4]。 1.4 实验动物分组 将30只小鼠随机分为3组，每组10只, 雌雄各半。正常组每天正常标准饲料喂养，模型组生理盐水5 ml灌胃，猫爪草提取物组灌服猫爪草中药醇提取物，每天按照浓度200 mg/kg 5 ml灌胃，在再加入标准饲料，连续4周，第4周后处死动物，收取血清（将血液3000 rpm×20 min，取上清，灭活，过滤除菌）[5]。 1.5 ELISA检测： 按照IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12的ELISA双抗体夹心试剂盒说明进行操作，将待测样品150 ul分别加入到预先已用各抗小鼠IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12单克隆抗体包被的酶标板上；将反应板充分混匀后置37℃温箱120 min，使标准品、待测样品中的抗原与单抗充分结合；洗板；每孔中加入生物素化的各一抗工作液50 ul，置37℃温箱60 min；洗板；每孔加辣根过氧化物酶标记的Streptavidin抗体工作液100 ul，将反应板置37℃温箱60 min，；洗板；每孔加入OPD（邻苯二胺）底物工作液100 ul