第五章色谱分析法概论58.pptVIP

色谱法的特点和应用 1.分离效能高 2.灵敏度高 可检测10-11~10-13g,适于痕量分析.色谱分析需试样量极少(?g或ng). 3.分析速度快 4.应用范围广 缺点：对未知物的定性分析比较困难。 方向：高选择性检测器；联用技术（ GC-MS、GC-FTIR、LC-MS、LC-NMR等）。 §15-2 色谱分离原理 一、分离原理 二、分配系数和容量因子 1. 分配系数（平衡常数）K 指在一定和温度和压力下，组分在两相间达到分配平衡时，组分在固定相中的浓度cs与组分在流动相中的浓度cm之比。 2、容量因子（分配比）k 指在一定温度和压力下，组分在两相间达到分配平衡时，组分在固定相中的质量 p 与组分在流动相中的质量 q 之比。 一、 基线 当没有待测组分进入检测器时,在实验操作条件下，反映检测器噪声随时间变化的曲线称为基线，稳定的基线应该是一条水平直线。 二、峰高 色谱峰顶点与基线之间的垂直距离，以（h）表示。 三、区域宽度 用于衡量柱效率及反映色谱操作条件的动力学因素。 表示色谱峰区域宽度通常有三种方法: 1)标准偏差?---即0.607倍峰高处色谱峰宽的一半。 2)半峰宽Y1/2---即峰高一半处的峰宽度。它与标准偏差的关系为: Y1/2=2.354? 3)峰底宽度Yb--即色谱峰两侧拐点上的切线在基线上截距间的距离。它与标准偏差?的关系是 Yb = 4 ? 四、保留值 1.保留值的定义 (1)死时间tM 不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为死时间. (3)调整保留时间tR′ tR′= tR ? tM 由于组分在色谱柱中的保留时间tR包含了组分随流动相通过柱子所需的时间和组分在固定相中滞留所须的时间，所以tR ′实际上是组分在固定相中保留的总时间。 保留时间是色谱法定性的基本依据. 但同一组分的保留时间常受到流动相流速的影响，因此色谱工作者有时用保留体积来表示保留值。 4.相对保留值 某组分2的调整保留值与组分1的调整保留值之比，称为相对保留值。 由于相对保留值只与柱温及固定相性质有关，而与柱径、柱长、填充情况及流动相流速无关，因此，它在色谱法中，特别是在气相色谱法中，广泛用作定性的依据。 在定性分析中，通常固定一个色谱峰作为标准（s），然后再求其它峰（i）对这个峰的相对保留值 。 在多元混合物分析中，通常选择一对最难分离的物质对，将它们的相对保留值作业重要参数，称选择因子，用符号?表示，即 式中tR ?(2)为后出峰的调整保留时间，所以?总是大于1的。 ?可作为衡量固定相选择性的指标。 ?越大，越容易分离。?=1，分离不能实现。 从色谱流出曲线中，可得许多重要信息： (1) 根据色谱峰的个数，可以判断样品中所含组分的最少个数； (2) 根据色谱峰的保留值，可以进行定性分析； (3) 根据色谱峰的面积或峰高，可以进行定量分析； (4) 色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色谱柱分离效能的依据； (5) 色谱峰两峰间的距离，是评价固定相（或流动相）选择是否合适的依据。 下图是 A、B两组分沿色谱柱移动时，不同位置处的浓度轮廓。 第一、二点是完全分离的必要条件。作为一个色谱理论，它不仅应说明组分在色谱柱中移动的速率，而且应说明组分在移动过程中引起区域扩宽的各种因素。塔板理论和速率理论均以色谱过程中分配系数恒定为前提，故称为线性色谱理论。 在实际工作中，计算出来的 n 和 H 值有时并不能充分地反映色谱柱的分离效能，因为采用tR计算时，没有扣除死时间tM， 所以常用有效塔板数 n有效 表示柱效： 有效板高 ： 用热力学的观点阐明了溶质在色谱柱中的分配平衡和分离过程 解释了流出曲线的形状及浓度极大值的位置 提出了计算和评价柱效的参数 2 速率理论 1956年荷兰学者van Deemter（范第姆特）等在研究气液色谱时，提出了色谱过程动力学理论——速率理论。他们吸收了塔板理论中板高的概念，并充分考虑了组分在两相间的扩散和传质过程，从而在动力学基础上较好地解释了影响板高的各种因素。该理论模型对气相、液相色谱都适用。 （1）涡流扩散项 A 在填充色谱柱中，当组分随流动相向柱出口迁移时，流动相由于受到固定相颗粒障碍，不断改变流动方向，使组分分子在前进中形成紊乱的类似涡流的流动，故称涡流扩散。 (2) 分