现代分子生物学4章.ppt

Chapter 4 DNA Replication 内容提要 第一节 概述 第二节 细菌DNA的复制 第三节 真核DNA的复制 第四节 端粒复制 第五节 其他DNA复制方式 第一节 DNA复制的概述 半保留复制 复制的起点和方向 DNA的半不连续复制 RNA引物 DNA复制的酶体系 DNA合成的高保真性 一、半保留复制 （Semi-conservative Replication） 1、半保留模型的提出： 1953 Watson Crick： DNA双螺旋模型； DNA 复制的半保留模型 2、 DNA复制的三个模型： 半保留模型； 全保留模型； 分散模型 4、半保留复制机制 复制时DNA双螺旋的两条链解开，并分别作为模板指导互补链的合成。每个子代DNA的一条链来自亲代的DNA，另一条链则是新合成的 。 二、复制的起点和方向 1、复制起点 （origin）：　 复制起始处的特定DNA序列 2、复制终点（termini）： 复制终止处的特定DNA序列 3、复制子（replicons ）： DNA复制起点到两端终点的DNA单位 原核生物基因组：一个复制子 真核生物基因组：多个复制子 4、复制方向： 双向复制：单一起点的双向和多起点的双向 （腺病毒：单向） 双向复制（Bidirectional replication） 在同一复制起点两个复制叉以相反的方向移动 单向复制（Unidirectional replication） 单个复制叉从复制起点处向一个特定方向移动 复制叉 replication fork 双螺旋DNA 两条亲本链分开使复制进行的部位 复制泡 replication bubbles 复制时，两个复制叉合起来像一个小泡 5、复制的速度： 原核生物：50000bp/min 真核生物：1000~3000bp/min Continuous, semidiscontinuous, and discontinuous models of DNA replication 三、 DNA的半不连续复制 1968年，Okazaki，半不连续复制模型 1、半不连续复制（semidiscontinuous replication） 前导链的连续合成和滞后链的不连续合成的复制模式 2、前导链（leading strand） 以5￠-3￠方向连续合成的DNA 链 3、滞后链（lagging strand） 总体上沿着3￠到5￠方向延伸，但以小片段形式(5￠-3￠)不连续合成，最后共价连接起来 4、冈崎片段（Okazaki fragment） 在不连续复制中产生的短片段，随后被连接成完整的链 E.coli 1000-2000nt 真核生物 100-200nt 四、RNA引物（RNA primer） 1、定义 与一条DNA链配对的短核苷酸序列 (通常是RNA)，提供自由3￠-OH末端，使DNA聚合酶开始合成DNA链。 2、功能 RNA引物可以提供3’-OH末端作合成新DNA链起点； 提高了DNA复制的准确性。 3、引发活动 前导链 (leading strand): 引发酶（primase） 滞后链 (lagging strand): 引发体（primosome） 引发酶：在DNA复制中合成RNA引物的一种RNA聚合酶 引发体：指在半不连续DNA复制中，每个岗崎片段合成引发反应中涉及的蛋白质复合体。引发体能沿着DNA 移动，参与连续的引发反应。 五、DNA复制的酶体系 （一）参与DNA复制的蛋白质 1、DNA解旋酶（DNA helicase） 作用：解开双链；ATPase Dna B (E. coli ) 2、单链结合蛋白（ssb） 作用：防止单链退火 （在原核细胞中表现出协同效应） 3、引发酶（primase）：如Dna G (E. coli ) 4、DNA连接酶（DNA ligase） 催化DNA链的两个末端的共价连接； 需要能量：NAD（E. coli ）/ ATP（真核） 5、拓扑异构酶 6、DNA聚合酶 （二）DNA聚合酶催化的聚合反应 1、以脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)为底物催化合成DNA 2、需要模板(3’ → 5’)和引物的存在 3、不能从头合成新的DNA链（必须有3 ’ -OH末端） 4、催化dNTP加到生长中的DNA链的3’