蛋白检测芯片.ppt

蛋白质芯片是指固定于支持介质上的蛋白质构成的微阵列。蛋白芯片技术的基本原理: 将各种蛋白质有序地固定于滴定板、滤膜和载玻片等各种载体上，然后，用标记了特定荧光的蛋白质或其他成分与芯片作用，经漂将未能与芯片上的蛋白质互补结合的成分洗去，再利用荧光扫描仪或激光共聚焦扫描技术，测定芯片上各点的荧光强度，通过荧光强度分析蛋白质与蛋白质之间相互作用的关系，由此达到测定各种蛋白质功能的目的。固定在芯片上的蛋白可以是：抗原、抗体、小肽、受体和配体、蛋白质-DNA和蛋白质-RNA复合物等。  分类： 蛋白功能芯片----天然蛋白点加在基片上，了解体  系中哪种蛋 白能与已知的某种蛋白结合，用于天 然蛋白活性及分子亲和性研究。  蛋白检测芯片---- 将具有高度亲和特异性的探针 分子（如单克隆抗体）固定在基片上，用于识别复 杂生物样品中的目标蛋白/多肽。 蛋白芯片较之传统分析方法主要有以下优点:(1)蛋白芯片上可以实现成千上万个蛋白质样品的高通  量平行分析, 一次实验可提供大量数据-----高通量;(2)有高的信噪比，高准确性、高灵敏度;(3)所需样品量极少----微量化;(4)在整个基因组和蛋白质组水平将ＤＮＡ序列信息与 蛋白质产物直接联系起来。(5)快速、微型化和自动化。  应用：1.基因表达产物的筛选——德国Lueking2.病变细胞中分子标记蛋白的研究 对病原微生物的检测—— Rowe 对肿瘤的诊断—— Englert 3.分子相互作用研究： 抗原/抗体相互作用研究， 酶与底物相互作用研究， ＤＮＡ、ＲＮＡ及小分子与蛋白质相互作用研究   蛋白芯片平台包括：芯片制造、处理、表面化学、检  测试剂、扫描和分析该系统适用于多种蛋白检测，包括：多样品微量免疫测定、蛋白质-抗体、抗体-蛋白质、抗体-抗原、蛋白质-蛋白质和蛋白质-药物的检测。生物芯片技术的核心是生物芯片的制备及反应信号的检测。蛋白质芯片的制作原理有多种,片基可采用尼龙膜、聚丙烯酰胺凝胶、玻片、硅片和金片等 芯片制作系统 芯片制作系统主体 4针机械手从384孔板中取样 48针的机械手进行点样（48针机械手可以在6小时内对50个具有1,000点样点的芯片进行点样） 针状点样枪头： 点样针点样示意图 操作控制板 洗涤/干燥台  信号检测系统 扫描软件的主操作界面 抗体芯片抗体芯片的称谓来源于免疫学角度,由于其在微生物感染检测中巨大的潜在应用价值而引起人们广泛的兴趣,是蛋白质芯片研究中进展速度较快的一个分支。抗体芯片：生物样品蛋白表达的抗体芯片完整系统的作用是用于比较两个生物样品，检测两者蛋白表达的相对差别。抗体芯片由数百个按一定顺序共价结合在载玻片上的单克隆抗体组成。由细胞单克隆产生的单一构型的蛋白，这些抗体能够大量产生，而且对可以在细胞表面发现的特定目的抗原具有特异的亲和力，这些抗原往往是恶性的。 抗体芯片优点：1.可以通过同时比较数百种蛋白，使特定蛋白与我们感 兴趣的生理和病理过程发生关系。2.使用单克隆抗体准确性高，敏感度高，专一性强。3.单克隆抗体的使用时芯片制作只需知道其DNA序列。4.通用性。抗体芯片的应用： 不同蛋白表达的测定 ；  毒性检测； 疾病研究，诊断筛选； 癌症研究； 药物开发等。 Ab Microarray 380(Cat.No.K1847-1)----Clontech公司第一个商业化抗体芯片 　特点:* 整个分析过程可以在一天内完成* 用荧光分析的方法比较两个样品之间378个蛋白质的相  对丰度* 适用于包括组织、细胞系、体液在内的多种生物样品* 试剂盒提供完整的样品抽提制备、标记、孵育所需的 Buffer，特别设计的样品制备的过程能保持样品的完整 性和溶解性，保证制备样品具有代表性和一致性。* 芯片上的抗体包含针对信号传导、癌症、细胞周期调控、 细胞结构、凋亡和神经生物学等广泛的生物功能的相关 蛋白，跨度大、适用范围广。* 芯片上的抗体分别经过特异性抗原、细胞系和组织的检 测，灵敏度高达pg/ml* 开放性的芯片平台设计，可以用各种型号DN