抗菌肽gk1 在大肠杆菌中的融合表达.pdf

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, January 25; 24(1): 21-26 journals.im.ac.cn Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@im.ac.cn ©2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved. 研究报告 GK1 1, 2 1 1 1 2 1, 3 陆海荣 , 李国栋 , 吴宏宇 , 黄晋江 , 汪世龙 , 黄青山 1 , 201206 2 , 200092 3 , 200433 : 为高效表达抗菌肽 GK1 并避免 GK1 的高抗菌活性对大肠杆菌宿主菌的致命影响, 将经改造后的人胰岛素原 (mhPI)与 GK1 的融合基因(mhPI-GK1)克隆到表达载体 pET28a 中, 构建出表达质粒 pET28a-mhPI-GK1, 转化至大肠杆菌 BL21(DE3) 中进行表达。融合蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达, 表达量占菌体总蛋白的 20% 。经 CNBr 裂解、阳离 子交换层析和 RP-HPLC 纯化后, 每升发酵液可获得 5.7 mg 纯度大于 97%的重组 GK1 。质谱检测显示重组 GK1 的分子 量为 2794.0 D, 抑菌活性实验表明纯化后的重组 GK1 和化学合成 GK1 具有相同的抗菌活性。为利用基因工程方法大规 模生产 GK1 奠定了基础。 : 抗菌肽, 融合蛋白, 大肠杆菌 Fusion Expression of the Antimicrobial Peptide GK1 in Escherichia coli 1,2 1 1 1 2 1,3 Hairong Lu , Guodong Li , Hongyu Wu , Jinjiang Huang , Shilong Wang , and Qingshan Huang 1 Shanghai HI-Tech United Bio-Technological RD Co. Ltd., Shanghai 201206, China 2 Institute of Protein Research , Tongji University, Shanghai 200092, China 3 State Key Laboratory of Genetic Engineering, Institute of Genetics, School of Life Sciences, Fudan University, Shanghai 200433, China Abstract: The antimicrobial peptide GK1, a derivative of Cecrop