狂犬病病毒核蛋白基因在大肠杆菌中稳定表达条件 - 吉林农业大学学报.pdf

DOI :10.13327/j.jjlau.2006.05.028 　285 　　　　　　　 Vol.28 No.5　 　2006 10 Journal　of　Jilin　Agricultural　University October 2006　 1, 2 1 1, 2 1 1 于志凤 , 张守峰 , 刘　晔 , 张　菲 , 扈荣良 (1.军事医学科学院军事兽医研究所, 长春130062;2.吉林大学畜牧兽医学院, 长春 130062) 　:将狂犬病病毒SRV9 株核蛋白基因按正确的读码框克 至GST 融合表达载体pGEX-4T-1 中, 转化至 大肠杆菌Rosetta 株, IPTG 诱导表达。 表达的融合蛋白经SDS分析显示, 相对分子量约为82 kD, 与预 期大小 一致。Western-blot 检测结果表明, 融合蛋白能与多克 阳性血清发生特异性反应。 为获取大量E ISA 包被用核蛋白, 试验还借助SDS方法对重组目的基因的表达条件进行了优化, 比较了诱导温度、菌密 度、IPTG 浓度、诱导时间等参数对重组基因表达的影响, 以确定最佳诱导表达条件。 结果表明:27 ～ 32℃, OD 0.3～ 0.4, IPTG 0.06 mmol/ 、诱导至OD 值不再增加时为最佳诱导表达条件。 优化后经扫描分析显示, 550 550 所表达融合蛋白占菌体总蛋白的20%以上。 经包涵体纯化和亲和层析纯化, 可获得纯度较高的GST 融合蛋 白。 :狂犬病病毒核蛋白;大肠杆菌;诱导温度;菌密度;IPTG 浓度;诱导时间 :S852.65;Q786　　　:A　　　:1000-5684(2006)05-0581-05 Stable Expression and Purification of Rabies Virus Nucleoprotein in Escherichia coli 1, 2 1 1, 2 1 2 YU Zhi-feng , ZHA NG Shou-feng , LIU Ye , ZHA NG Fei , HU Rong-liang (1.Institute of Military Veterinary Science, Academy of Military Medical Sciences, Changchun 130062; China;2.College of Animal Husbandry and Veterinary Medicine, Jilin University , Changchun 130062, China) Abstract:By inserting the Rabies virus strain SRV9 N gene into the expressing vector pGEX-4T-1, the recombinant plasmid pGEX-RN was constructed.The pGEX-RN was then transformed into E.coli strain Rosetta and induced with IPTG.The expression was identified by SDSand Western-blot anal