三种蛙血红蛋白氧解离曲线影响因子及与栖境的关系 - 生态环境学报.doc

三种蛙血红蛋白氧解离曲线影响因子及与栖境的关系 周 伟，房世杰 西南林学院 保护生物学学院，云南 昆明 650224 摘要：以滇蛙Rana pleuraden、无指盘臭蛙R. grahami和昭觉林蛙R. chaochiaoensis为研究对象，应用血红蛋白（Hb）氧解离曲线分析方法，探讨在海拔差异程度不明显的情况下3种蛙Hb氧解离曲线的特点，并结合它们栖息小生境的分化，阐述可能影响其Hb氧解离曲线的因素，为进一步研究它们的生态分化提供依据。研究结果表明，3种蛙Hb氧和能力具有稳定的半饱和氧分压（P50）值，其中滇蛙和无指盘臭蛙的P50值种间差异不显著（p0.05），二者的氧解离曲线几乎重叠；而昭觉林蛙的P50值与另2种蛙的种间差异均显著（p0.05），它们的氧解离曲线相互明显分离。这3种蛙Hb氧和能力的强弱关系是：滇蛙Hb氧和能力略大于无指盘臭蛙，而远大于昭觉林蛙。导致3个相近种Hb氧和能力变化的原因为：血液的pH值和PCO2是影响Hb氧合能力的主要因素；皮肤的通透性影响Hb氧和能力；不同种类活动方式和栖息小生境的差异，甚至季节变化均影响血液参数的变化。 关键词：血红蛋白氧解离曲线；血液参数；栖息小生境；滇蛙；无指盘臭蛙；昭觉林蛙 中图分类号：Q14 文献标识码：A 文章编号：1672-2175（2005）02-0234-05血红蛋白（hemoglobin，Hb）是脊椎动物体内O2和CO２运输的重要工具，其特性是在高氧分压下与氧结合，低氧分压下氧解离为动物细胞能量代谢所需的氧[1]。Hb与氧结合的能力可以用血液中Hb的氧饱合度和血液氧分压来描述，即Hb氧解离曲线。通过比较曲线的相对位置，可以判断各曲线所代表的Hb氧和能力的强弱[2]。 运用氧解离曲线法研究Hb或肌红蛋白的氧和能力，过去多集中在比较分布于不同海拔、不同啮齿类种间氧和能力的差异，阐述它们血红蛋白对高海拔低氧环境的适应性，或者肌红蛋白含量与乳酸脱氢酶活性的关系[3, 4]；亦有人运用此法研究过同一海拔不同人体Hb氧合能力异常的情况[5, 6]。 两栖类是一群较为特殊的脊椎动物，其皮肤具有较强的通透性，且皮下微血管丰富，使其皮肤成为主要的呼吸器官[7]。目前尚未见两栖类不同种类皮肤呼吸功能差异的比较研究报道。但从血红蛋白的功能考虑，同一海拔高度不同种类氧解离曲线的差异既可能反映种间血红蛋白与氧结合能力的差异，也可能间接反映它们皮肤通透性的差异及与小生境之间的关系。因此，选择分布海拔相同或接近，亲缘关系相近的两栖类种类，采用Hb氧解离曲线法进行Hb氧和能力的比较，分析在海拔差异程度不明显的情况下，不同种类Hb氧解离曲线的特点，并结合它们的栖息小生境，阐述其中可能影响Hb氧解离曲线的因素，可望将血液生理学研究与生态学研究相结合，使研究工作深化。 1 材料与方法 1.1 取材与参数测定及其统计分析 本项目选择共同隶属于蛙属的滇蛙Rana pleuraden Boulenger、无指盘臭蛙R. grahami Boulenger和昭觉林蛙R. chaochiaoensis Liu作为研究对象。在昆明地区它们分布大生境相似，海拔差异程度不明显。实验用蛙2003年4月～5月采自昆明官渡区白沙河及西山区花红洞，石林县西街口。滇蛙13只（2♂11♀），无指盘臭蛙13只（8♂5♀），昭觉林蛙7只（4♂3♀）。标本带回实验室暂养24~48 h，降低或避免蛙类自然状态时的活动强度及采集捕捉可能对其血液参数造成的影响。 参照李卫国等（1995）的方法采集血样[8]。每一个体分别用一次性注射器采集0.05～0.5 ml血样，用500单位/ml肝素钠溶液（肝素钠效价150 u/mg）与血液混合均匀，暂存于便携式冰盒中，放入4 ℃冰箱中保存。血样最终送云南省第一人民医院呼吸科功能实验室，用血气分析仪（Blood Gas Analyzer Compact3）作血液参数测定，包括：氧饱和度（O2Sat%）、氧分压（PO2）、pH值、二氧化碳分压（PCO2）和饱和度为50%的氧分压（P50）等。 用SPSS 11.5对测定的参数进行统计分析。首先检测数据是否符合参数统计条件若符合则对种变量同时进行ANOVA）；若差异显著，随后做多重比较 图1 滇蛙、无指盘臭蛙及昭觉林蛙血红蛋白氧解离曲线 Fig. 1 Oxygen dissociation curves of Hb in Rana pleuraden, Rana grahami and Rana chaochiaoensis 血红蛋白的氧饱和度（Y）定义为：Y=血红蛋白中被占的氧合部分／血红蛋白氧合部位总数。通常用P50表示Hb对O2的亲和力，是指Hb氧饱和度达50%时的氧分压。P50越小，Hb对氧的亲和力越强