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討 論 研究顯示人類巨細胞病毒的IE2-86 蛋白可能參與調節人類巨細胞 病毒的致病力及由潛伏期到感染活躍期的再活化(Meier, 2001; Murphy et al., 2002; Prosch et al., 1995; Wanishsawad et al., 2000)，且目 前已知 IE2-86 蛋白有兩種功能，第一為活化異位基因的轉錄表現， 不僅能活化病毒本身的E 期基因，同時也能活化其他病毒的基因，如 HIV 的LTR(Duclos et al., 1989; Yeung et al., 1993)；或宿主細胞基因， 如熱衰竭蛋白〈heat shock protein；hsp〉(Caswell et al., 1996; Hagemeier et al., 1992b)，c-fos 及 c-myc 等轉錄因子(Hagemeier et al., 1992a; Hagemeier et al., 1992b; Yoo et al., 1996)。其次是回饋抑制IE2-86 蛋白 本身的啟動子MIEP。於此論文中我們利用CASTing-SAAB 複合步驟 篩選可能與IE2-86 蛋白結合的人類巨細胞病毒DNA 序列，並且搭配 DNA 足跡分析與電泳漂移分析實驗進一步發現 IE2-86 蛋白與 MIEP 間的相互關係不只是在TATA box 與轉錄起始位置之間的序列而已， 而更擴及TATA 的上游區域。 IE2-86 蛋白的 DNA 結合能力已由 1993 年於 Stamminger 及 Hayward 等人提出，並確認此結合能力位於IE2-86 蛋白的C 端(Chiou et al., 1993; Lang and Stamminger, 1993)，所結合的DNA 具有一定的 56 序列及位置(Lang and Stamminger, 1994; Waheed et al., 1998)。而我們 更進一步的探討IE2-86 蛋白所能結合的人類巨細胞病毒DNA 時發現 〈表2〉，IE2-86 蛋白並非只有結合在原先的CRS 上，而是有更多的 人類巨細胞病毒DNA 可與IE2-86 蛋白相互作用，調節病毒基因的表 現。事實上IE2-86 蛋白並不是與MIEP 上的CRS 發生結合作用，在 其他的病毒基因，甚至是細胞基因都被發現可與 IE2-86 蛋白產生結 合作用而調節該基因的表現〈表 5〉，然而所產生的調節作用卻不一 定是如 CRS 般抑制基因表現的負面調節(Bresnahan et al., 1998; Rodems et al., 1998)，但是至目前為止發現可與IE2-86 蛋白結合的絕 大多數DNA 序列均呈現一定的相似性〈表5〉(Lashmit et al., 1998; Liu et al., 1991; Yeung et al., 1993)，不論是正面活化反應或負面的抑制反 應皆具備所謂的類CRS 序列〈14-nt CRS motif〉(Chiou et al., 1993)， 如下圖所示 5’ 3’ CGNNNNNNNNNNCG 前後共十四個核苷 酸的兩端為CG 雙核苷 酸，中間的十個序列為多A 及T 的核苷 酸，以CRS 為例，其中間的十個序列的A 及T 的含量即 高達70%〈表7〉。整體而言，本論文所獲得的DNA 序列A 及T 的 含量比例並非特別高〈約在 56%左右〉，但序列之中卻存在多個 CG 57 雙核苷 酸，因此若仔細分析這些獲得的DNA 序列會發現這些CG 雙 核苷 酸所夾的序列仍是以 A 及 T 為主，尤其是 WT021、WT032 及 WT034〈表4〉。 若把 CASTing-SAAB 複合步驟篩選出的部份DNA 片段直接以放 射線標記，進行電泳漂移分析〈圖5〉，則WT021 及WT034 與IE2-86 蛋白作用後產生專一性的漂移現象，且WT021